基于DNA条形码的常见食毒易混鳞茎植物分子鉴定研究

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黄水仙(Naraissus pseudonarcissus)、水仙(Narcissus tazttaL.var.chinensis)、石蒜(Lycoris radiata)、葱莲(Zephyranthes candida)、郁金香(Tulipa gesnerina)、风信子(Hyacithus orientalis)等鳞茎植物是我国常见的花卉品种,常见于城市绿化和家居美化,但由于其含有毒素,且形态学特征又与可食用的葱(Allium fistulosum)、韭(Allium tuberosum)、蒜(Allium sativum)、洋葱(Allium cepa)、薤白(Allium macrostemon)、荞头(Allium chinense)等鳞茎植物相似,导致人畜误食而中毒。如何高效准确地鉴定常见食毒易混鳞茎植物对于避免有毒鳞茎植物误食及误食后的有效治疗十分关键。DNA条形码(DNAbarcoding)是指一种利用标准DNA序列,进行快速、准确和自动化的物种鉴定方法。本研究以石蒜科(Amaryllidaceae)有毒鳞茎植物黄水仙、水仙、石蒜、葱莲,百合科(Liliaceae)有毒鳞茎植物郁金香、风信子与百合科可食用鳞茎植物葱、韭、蒜、洋葱、薤白、荞头为研究对象,对该12种植物,编制植物分类检索表,构建DNA条形码鉴定数据库,筛选最适DNA条形码建立PCR-RFLP鉴定体系,主要研究结果如下:1.编制植物分类检索表,对黄水仙、水仙、石蒜、葱莲、郁金香、风信子、葱、韭、蒜、洋葱、薤白、荞头的形态学特征进行分析鉴别,发现有毒鳞茎植物的鳞茎和叶片的形态学特征与可食用鳞茎植物十分相似,大多需要对花的特征进行进一步观察鉴定才能区分。因此在样本不完全的情况下,极易产生混淆,需要通过分子标记等不同研究方法来对其做进一步的分析鉴定。2.将ITS2、matK、rbcL、psbA-trn 序列作为DNA条形码候选序列,用于黄水仙、水仙、石蒜、葱莲、郁金香、风信子、葱、韭、蒜、洋葱、薤白、荞头中的有毒物种的鉴定。综合考虑四种候选基因的K2P遗传距离分布、种内种间遗传距离差异以及分子系统进化树的鉴定效率,筛选得到matK基因为可用于有毒鳞茎植物鉴定的最适DNA条形码,matK与ITS2的DNA条码片段组合有更好的鉴定效率。3.利用筛选到的最适条形码matK基因结合PCR-RFLP技术,选取六种限制性内切酶(Acc Ⅰ、Ava Ⅱ、ScrF Ⅰ、Bsm Ⅰ、BsmⅠ、Ban Ⅱ、Bbs Ⅰ)对黄水仙、水仙、石蒜、葱莲、郁金香、风信子、葱、韭、蒜、洋葱、薤白、荞头这12种鳞茎植物的matK基因进行酶切。结果表明Acc I可将石蒜科的黄水仙、水仙、石蒜、葱莲与百合科的郁金香、风信子、葱、韭、蒜、洋葱、薤白、荞头区分开,BanII可将郁金香、风信子与葱、韭蒜、洋葱、薤白区分开,综合AccⅠ和Ban Ⅱ的鉴定结果,即可鉴定出12种鳞茎植物中的有毒种(黄水仙、水仙、石蒜、葱莲、郁金香、风信子);结合AvaIⅡ、ScrF Ⅰ、Bsm Ⅰ可将四种石蒜科有毒植物完全鉴别;利用BbsⅠ可将百合科有毒植物郁金香和风信子鉴定区分。
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