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背景：胶质瘤是成人中最常见的原发性脑肿瘤，占恶性脑肿瘤的70%以上，因其发病病程短，易复发，故根治较为困难。近年来胶质瘤发病率逐年递增，年增长率约为1%～2%，严重威胁人类健康。神经调节蛋白（Neuregulin,NRG）是表皮生长因子家族重要成员，在细胞生存、迁移以及分化中都发挥着不可或缺的作用。Nrg主要是作为配体结合并活化表皮生长因子（ErbBs）家族酪氨酸激酶，参与神经发育等生命过程，并介导细胞间多种信号的转导，进而调控一系列广泛的生物过程，如肿瘤形成。大量研究表明神Nrg可能参与胶质瘤的形成。根据编码基因不同，可将其分为神经调节蛋白1-4:，即NRG1、NRG2、NRG3和NRG4。其中NRG1已有大量研究，而有关NRG2、NRG3和NRG4的功能研究还不多，对其作用机制也知之甚少。
目的：1、研究不同神经调节蛋白对人胶质瘤增殖、迁移的影响。2、比较观察神经胶质瘤细胞中NRG2、NRG3和NRG4与ErbB受体磷酸化激活的关系；3、比较研究NRG2、NRG3、NRG4对下游信号通路的影响，进而明确NRG2、NRG3和NRG4各自激活的主要信号通路。
方法：1、以浓度0、2、5、10nM重组神人源经调节蛋白（rNrg1β、rNrg2β、rNrg3β、rNrg4β）处理给予人胶质瘤SHG-44细胞和U251细胞以及人脑星形胶质母细胞瘤U-87MG细胞，并进行细胞划痕实验。分别于培养0h、6h、24h和48h后测量划痕面积。2、给予人胶质瘤SHG-44细胞和U251细胞以及人脑星形胶质母细胞瘤U-87MG细胞以重组神经调节蛋白进行处理，使用Transwell细胞迁移实验来检测重组神经调节蛋白对细胞迁移的影响，使用结晶紫对贴附于Transwell下侧的细胞进行染色，比较观察穿过Transwell下侧细胞数量的变化。3、给予人胶质瘤SHG-44细胞和U251细胞以及人脑星形胶质母细胞瘤U-87MG细胞不同浓度重组神经调节蛋白，并于培养0h、6h、24h和48h后使用CCK-8试剂盒，通过吸光度测定比较分析不同重组NRGs对胶质瘤细胞增殖的影响。4、以浓度0、2、5、10nM重组人源神经调节蛋白（rNrg1β、rNrg2β、rNrg3β、rNrg4β）处理人脑星形胶质母细胞瘤U-87MG细胞于处理6h、24h和48h后提取蛋白进行蛋白免疫印迹实验。检测相关受体ErbB2、ErbB3和ErbB4的磷酸化激活水平以及相关信号通路相关分子Stat5、AKT1、ERK1/2磷酸化激活变化情况。5、GraphpadPrism7软件用来进行统计学分析与作图。
结果：1、细胞划痕实验结果表明外源性人源重组神经调节蛋白（rNRG1β、rNRG2β、rNRG3β、rNRG4β）均能促进SHG-44细胞、U251细胞以及U-87MG细胞的迁移，5nM的rNRG2β处理U-87MG细胞12小时，迁移速度的增加最为显著。2、细胞迁移实验结果表明，与溶剂对照组相比，5nMrNRG2β处理三种细胞系12小时，均可显著增多迁移细胞数量，以迁移的U-87MG细胞数量增多最为显著。3、与溶剂对照组相比，所有重组神经调节蛋白对SHG-44、U-251和U-87MG三个细胞系的细胞增殖均有促进作用，但不同浓度之间细胞增殖没有显著性差异。4、蛋白免疫印迹结果表明，使用外源性人源重组神经调节蛋白（rNRG1β、rNRG2β、rNRG3β、rNRG4β）处理U-87MG细胞6小时，ErbB2、ErbB3、AKT1、ERK1/2磷酸化水平呈剂量依赖性升高，并且随着处理时间的延长，蛋白磷酸化水平下降。
结论：1、人源重组神经调节蛋白rNRG2β可影响胶质瘤细胞的迁移，明显增加胶质瘤的细胞迁移速度。2、各亚型人源重组神经调节蛋白rNRG1β、rNRG2β、rNRG3β、rNRG4β对胶质瘤细胞的增殖不明显。3、NRG1和NRG2通过激活ErbB2和Erbb3受体进而激活AKT1和ERK1/2两个下游信号通路进而参与调控胶质瘤细胞迁移和转移。
目的：1、研究不同神经调节蛋白对人胶质瘤增殖、迁移的影响。2、比较观察神经胶质瘤细胞中NRG2、NRG3和NRG4与ErbB受体磷酸化激活的关系；3、比较研究NRG2、NRG3、NRG4对下游信号通路的影响，进而明确NRG2、NRG3和NRG4各自激活的主要信号通路。
方法：1、以浓度0、2、5、10nM重组神人源经调节蛋白（rNrg1β、rNrg2β、rNrg3β、rNrg4β）处理给予人胶质瘤SHG-44细胞和U251细胞以及人脑星形胶质母细胞瘤U-87MG细胞，并进行细胞划痕实验。分别于培养0h、6h、24h和48h后测量划痕面积。2、给予人胶质瘤SHG-44细胞和U251细胞以及人脑星形胶质母细胞瘤U-87MG细胞以重组神经调节蛋白进行处理，使用Transwell细胞迁移实验来检测重组神经调节蛋白对细胞迁移的影响，使用结晶紫对贴附于Transwell下侧的细胞进行染色，比较观察穿过Transwell下侧细胞数量的变化。3、给予人胶质瘤SHG-44细胞和U251细胞以及人脑星形胶质母细胞瘤U-87MG细胞不同浓度重组神经调节蛋白，并于培养0h、6h、24h和48h后使用CCK-8试剂盒，通过吸光度测定比较分析不同重组NRGs对胶质瘤细胞增殖的影响。4、以浓度0、2、5、10nM重组人源神经调节蛋白（rNrg1β、rNrg2β、rNrg3β、rNrg4β）处理人脑星形胶质母细胞瘤U-87MG细胞于处理6h、24h和48h后提取蛋白进行蛋白免疫印迹实验。检测相关受体ErbB2、ErbB3和ErbB4的磷酸化激活水平以及相关信号通路相关分子Stat5、AKT1、ERK1/2磷酸化激活变化情况。5、GraphpadPrism7软件用来进行统计学分析与作图。
结果：1、细胞划痕实验结果表明外源性人源重组神经调节蛋白（rNRG1β、rNRG2β、rNRG3β、rNRG4β）均能促进SHG-44细胞、U251细胞以及U-87MG细胞的迁移，5nM的rNRG2β处理U-87MG细胞12小时，迁移速度的增加最为显著。2、细胞迁移实验结果表明，与溶剂对照组相比，5nMrNRG2β处理三种细胞系12小时，均可显著增多迁移细胞数量，以迁移的U-87MG细胞数量增多最为显著。3、与溶剂对照组相比，所有重组神经调节蛋白对SHG-44、U-251和U-87MG三个细胞系的细胞增殖均有促进作用，但不同浓度之间细胞增殖没有显著性差异。4、蛋白免疫印迹结果表明，使用外源性人源重组神经调节蛋白（rNRG1β、rNRG2β、rNRG3β、rNRG4β）处理U-87MG细胞6小时，ErbB2、ErbB3、AKT1、ERK1/2磷酸化水平呈剂量依赖性升高，并且随着处理时间的延长，蛋白磷酸化水平下降。
结论：1、人源重组神经调节蛋白rNRG2β可影响胶质瘤细胞的迁移，明显增加胶质瘤的细胞迁移速度。2、各亚型人源重组神经调节蛋白rNRG1β、rNRG2β、rNRG3β、rNRG4β对胶质瘤细胞的增殖不明显。3、NRG1和NRG2通过激活ErbB2和Erbb3受体进而激活AKT1和ERK1/2两个下游信号通路进而参与调控胶质瘤细胞迁移和转移。