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目的:研究信号转导和转录激活蛋白5A(signal transducer and activator of transcription 5A,STAT5a)在抑制Kupffer细胞(Kupffer cells,KCs)焦亡并诱导内毒素耐受中的作用。方法:本实验共分为体内实验和体外实验两部分1.体外实验:(1)提取雄性C57BL/6小鼠KCs,利用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)体外诱导KCs形成内毒素耐受(10ng/ml+1000ng/ml)和非耐受(1000ng/ml)模型,Western blot检测焦亡相关蛋白caspase1和GSDMD,ELISA检测IL-1β、IL-18、IL-10的分泌情况,LDH释放测定法反映细胞膜完整性;(2)耐受组加入尼日利亚菌素(Nigericin),检测KCs焦亡增加后caspase1和GSDMD活化水平、炎症因子和LDH释放情况;(3)检测耐受组和非耐受组KCs中STAT5a的表达和活化情况;利用慢病毒干扰KCs中STAT5a表达后,观察敲低STAT5a对细胞焦亡的发生和内毒素耐受形成的影响;(4)检测STAT5a干扰前后NLRP3和NF-κB的变化水平;利用NF-κb抑制剂BAY 11-7082抑制STAT5a敲低组KCs中NF-κB的活化后,观察细胞焦亡的发生和内毒素耐受形成的情况。2.体内实验:通过腹腔注射LPS建立C57BL/6小鼠内毒素耐受和非耐受模型,检测其KCs中STAT5a的情况;(2)使用野生型(Wild type,WT)C57BL/6小鼠和慢病毒敲低STAT5a后的C57BL/6小鼠建立内毒素耐受模型,观察小鼠存活率及肝脏损伤程度,检测小鼠血清IL-1β、IL-18、IL-10以及AST、ALT水平,检测KCs中STAT5a、caspase1和GSDMD的水平。结果:1.在体外,非耐受组KCs的caspase1和GSDMD活化水平明显高于耐受组;非耐受组上清液中IL-1β、IL-18和LDH水平明显高于耐受组,IL-10水平低于耐受组;加入Nigericin的内毒素耐受组KCs中caspase1和GSDMD活化水平明显升高,IL-1β、IL-18和LDH释放增加,IL-10释放减少;内毒素耐受组STAT5a磷酸化水平明显高于非耐受组;慢病毒敲低STAT5a后,caspase1和GSDMD活化水平明显升高,且IL-1β、IL-18和LDH释放增加,IL-10释放减少,内毒素耐受形成受阻;STAT5a敲低后,KCs中NF-κB的磷酸化水平和NLRP3的表达水平明显升高,抑制NF-k B磷酸化后细胞焦亡减轻,能建立内毒素耐受。2.内毒素耐受小鼠KCs中STAT5a磷酸化水平高于非耐受组;STAT5a敲低后的小鼠无法建立内毒素耐受,血清IL-1β、IL-18水平升高,IL-10水平降低,生存率明显低于WT小鼠,肝脏损伤程度明显高于WT小鼠,KCs中caspase1和GSDMD活化水平明显高于WT小鼠。结论:1.KCs焦亡的发生抑制内毒素耐受的形成。2.STAT5a的活化抑制KCs焦亡,促进内毒素耐受形成。3.STAT5a通过NF-κB/NLRP3通路抑制NLRP3炎性小体活化,促进内毒素耐受。