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目的:采用体外培养的人胆管癌细胞株QBC939作为实验对象,观察三七皂甙制剂(Panax Notoginseng Saponins)对体外培养的人胆管癌细胞株QBC939生长抑制作用,探讨PNS对胆管癌生长抑制的作用机制,为胆管癌术后辅助治疗探索切实有效的新方法。方法:1测定体外培养的人胆管癌癌细胞株(QBC939)细胞活力、贴壁率,应用四唑盐比色法(MTT)测定QBC细胞在不同时间、不同浓度的OD值,绘制生长曲线,确定最佳细胞接种浓度及药物干预区间。2.四唑盐比色法(MTT)测定不同时间、不同浓度的三七皂甙制剂(PNS)对人胆管癌癌细胞株(QBC939)的生长增殖抑制率并于倒置显微镜观察细胞形态学变化。3. PI-Annexin V法检测三七皂甙制剂(PNS)作用后观察QBC细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术检测三七皂甙制剂(PNS)对QBC939细胞周期影响的分析以证实凋亡的存在;细胞划痕和侵袭实验检测三七皂甙制剂(PNS)对人胆管癌癌细胞株(QBC939)迁移、侵袭能力的影响。结果:1.人胆管癌细胞株(QBC939)常规培养,存活率均>95%符合本实验要求,MTT测定的生长曲线提示按照6×104/孔的密度接种于96孔板内可提供足够的细胞生长空间及营养成分,使细胞于接种12小时后,适应新环境,逐渐进入快速繁殖期。2.选取细胞接种于96孔板后的48小时左右,该区间能够保证细胞始终处于一个稳定的对数生长期:在此条件下MTT法检测不同浓度PNS对QBC939细胞生长抑制率具有时间和剂量依赖性。3PI-Annexin V法检测可见明显的QBC939细胞凋亡形态学改变;流式细胞术检测结果显示药物作用组可见典型的亚二倍体峰即凋亡峰(AP),且随浓度增大到1mg/ml时G2/M期比例明显增多,提示PNS可诱导QBC939凋亡,使其细胞周期阻滞于G2/M期,抑制细胞增殖;细胞划痕和侵袭实验结果显示PNS能够对降低QBC939细胞的迁移、侵袭能力有一定的作用。结论:本实验示:1.不同浓度三七皂甙制剂(PNS)作用不同时间对人胆管癌细胞(QBC939)增殖具有一定的抑制作用,呈时-效和量-效依赖关系,具有时间、剂量依赖性。2.三七皂甙制剂(PNS)能诱导人胆管癌细胞株(QBC939)凋亡。3.PNS能够对降低QBC939细胞的迁移、侵袭能力有一定的作用。4.三七皂甙制剂(PNS)可能是有前景的抑制胆管癌细胞的药物。