聚酮类化合物产生菌的基因筛选和阳性菌株的多相分类研究

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该文综述了放线菌在新药筛选中的重要性,从基因组和新药筛选角度阐述了放线菌次级代谢产物潜力挖掘的重要性及其途径.分析了聚酮类化合物生物合成机制和基因筛选聚酮类化合物产生菌的重要性和可能性.通过比较研究建立了微波炉法简单、快速、高效的提取固体培养的放线菌菌体基因组DNA的技术.比较了Ⅰ型和Ⅱ型聚酮类化合物生物合成酶的氨基酸序列和对应的基因序列,设计、筛选并得到了Ⅰ型和Ⅱ型聚酮类化合物产生菌基因筛选的引物.通过优化PCR反应条件建立了Ⅰ型和Ⅱ型聚酮类化合物产生菌基因筛选技术.对包括链霉菌、普通菌、嗜碱菌和嗜盐菌在内的1024株放线菌分别进行了Ⅰ型和Ⅱ型聚酮类化合物生物合成基因筛选,调查了不同环境放线菌菌群Ⅰ型和Ⅱ型聚酮类化合物生物合成基因的分布.结果表明链霉菌和极端环境放线菌,尤其是嗜碱菌是聚酮类化合物的潜在丰富来源.聚酮类化合物生合成基因阳性菌株的抗菌和其它生理活性筛选表明聚酮类化合物生合成基因阳性菌群的阳性率明显高于普通筛选的菌群,表明基因筛选可以提高新药筛选的效率.选择了其中12株形态等特殊的菌株进行了形态特征、培养特征、生理生化测定、细胞化学组分分析、DNA G+Cmol%、DNA同源性测定、16S rDNA全序列分析等相结合的多相分类方法的系统分类研究.从表型、基因型和系统发育三个层次对其分类地位进行了最终确定:菌株KM 4927被命名为粗糙链霉菌(Streptomyces scabrisporus sp.nov.),YIM 001被命名为河北链霉菌(Streptomyces hebeiensis sp.nov.),YIM 31724被命名为大理链霉菌(Streptomyces daliensis sp.nov.),YIM 33361被命名为多抗诺卡氏菌(Nocardia polyresistens sp.nov.),YIM 33378被命名为下龙诺卡氏菌(Nocardia xialongensis sp.nov.).建立了甲基脂酸菌属(Methyllipoidia gen.nov.),并将YIM 34827命名为甲基脂酸菌属的模式种丽江甲基脂酸菌(Methyllipoidia lijiangensis sp.nov.).建立了姜氏菌属(Jiangella gen.nov.),并将YIM 31775命名为姜氏菌属的模式种耐温姜氏菌(Jiangella thermotolerantsis sp.nov.).
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