【摘 要】
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研究背景:乳腺癌是发生在乳腺上皮组织的恶性肿瘤,是女性最常见的肿瘤之一,开发具有靶向能力的基因递送载体对乳腺癌的治疗具有重大意义。腺相关病毒（adeno-associated virus,AAV）具有安全性好、免疫原性低、表达稳定等优点,近年来AAV逐渐成为体内基因递送的主要载体,AAV的衣壳蛋白决定AAV的组织嗜性,因此对AAV衣壳蛋白的基因工程改造可以提高AAV对特定细胞的靶向感染能力,从而实
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研究背景:乳腺癌是发生在乳腺上皮组织的恶性肿瘤,是女性最常见的肿瘤之一,开发具有靶向能力的基因递送载体对乳腺癌的治疗具有重大意义。腺相关病毒（adeno-associated virus,AAV）具有安全性好、免疫原性低、表达稳定等优点,近年来AAV逐渐成为体内基因递送的主要载体,AAV的衣壳蛋白决定AAV的组织嗜性,因此对AAV衣壳蛋白的基因工程改造可以提高AAV对特定细胞的靶向感染能力,从而实现基因的靶向递送。目的:通过将上皮细胞黏附分子的特异性结合子EC1编码序列插入AAV2衣壳蛋白编码序列制备AAV2M-EC1病毒;在细胞和动物水平,探究AAV2M-EC1病毒对小鼠乳腺癌4T-1细胞的靶向性和介导自杀基因HSV-TK对4T-1细胞体内增殖的影响。方法:（1）分子克隆技术及PCR点突变构建AAV2M-EC1衣壳蛋白表达质粒;（2）病毒包装质粒瞬时转染HEK293T细胞包装病毒;（3）实时荧光定量PCR检测病毒包装滴度;（4）倒置荧光显微镜与流式细胞术检测病毒感染效率;（5）Western blotting验证重组AAV2M-EC1病毒衣壳蛋白的组成;（6）小动物活体成像检测AAV2M-EC1在荷瘤小鼠体内的分布。（7）以4T-1细胞移植瘤小鼠为模型,以AAV2M-EC1为载体靶向递送自杀基因HSV-TK探究对4T-1细胞体内增殖的影响。结果:（1）成功构建AAV2M-EC1病毒包装质粒。（2）AAV2M-EC1病毒包装系统可将EC1基因所表达的蛋白展示于病毒衣壳表面;（3）与对照载体相比,AAV2M-EC1-GFP对4T-1肿瘤细胞具有更高的感染效率。（4）病毒体内靶向性实验证明,与对照载体相比,AAV2M-EC1-LUC对肿瘤组织具有靶向感染能力。（5）以AAV2M-EC1病毒为载体的自杀基因治疗显著抑制4T-1细胞在小鼠体内的增殖。结论:与AAV2相比,通过分子克隆技术将乳腺癌细胞靶向分子蛋白EC1编码序列插入AAV2衣壳蛋白编码序列中,赋予了AAV2M-EC1病毒衣壳针对4T-1乳腺癌的靶向性;AAV2M-EC1病毒能够靶向递送自杀基因,抑制4T-1细胞在小鼠体内的增殖。本实验建立的AAV2M-EC1重组腺相关病毒具有用于乳腺癌治疗的潜在应用前景。
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