研究背景和目的: 药物性肝病(Drug Induced Liver Disease DILD)是指药物在治疗过程中，肝脏由于药物及其代谢产物的毒性损害或对药物的过敏反应所致的疾病，也称为药物性肝损伤。近年，随着药物种类的不断增多，药物性肝病的发生也逐年增加，严重者可致肝衰竭，需肝移植，甚至死亡。所以药物性肝病被越来越多的临床医师所重视。临床上将急性药物性肝病分为：(1)急性肝细胞型；(2)急性肝内淤胆型；(3)混合型。 药物性肝损伤机制包括直接性肝损伤和间接性肝损伤：直接性肝损伤是指药物或代谢物直接攻击靶细胞的细胞器；间接性肝损伤是指药物或代谢物引起的损伤除了靶细胞外还包括其他的细胞，比如巨噬细胞和/或免疫反应。由药物直接引起的致命的肝损伤很少见，但是肝细胞受损后引起的放大的炎症反应或免疫反应超过肝脏自身的修复和再生能力，从而加重了病情的发展。 在肝脏，TNF—α主要是由激活的枯否氏细胞释放的重要的促炎因子，它的产生被认为是肝脏炎症反应中最早的表现之一。TNF—α在各型急慢性病毒性肝炎、酒精性肝病及急性肝衰竭过程中扮演了重要的角色，临床实践中发现重型肝炎患者血清TNF—α水平明显升高。 本实验使用对乙酰氨基酚和氯丙嗪，分别复制急性肝细胞型和急性肝内淤胆型肝损伤的动物模型，并以TNF—α拮抗剂腹腔注射，通过检测TNF—α在大鼠药物性肝病中的表达，结合肝功生化及组织病理学的改变，探讨TNF—α与药物性肝病之间的关系。 材料和方法: 1.动物模型制备1.1分组60只SD大鼠(体重180-230g)，随机分为A、B、C、D、E、F组，每组10只，A组为空白对照组，B组为益赛普组，C组为对乙酰氨基酚组，D组为对乙酰氨基酚+益赛普组，E组为氯丙嗪组，F组为氯丙嗪+益赛普组。 1.2处理 B组给予益赛普2.5mg/kg腹腔注射[30]；C组给予对乙酰氨基酚溶液3g/kg灌胃(用40℃生理盐水配制)，同时予生理盐水腹腔注射；D组给予对乙酰氨基酚3g/kg灌胃，同时予益赛普2.5mg/kg腹腔注射；E组给予氯丙嗪75mg/kg腹腔注射；F组给予氯丙嗪75mg/kg，同时益赛普2.5mg/kg腹腔注射。A组不做处理。 2.实验指标检测2.1肝功生化指标检测： 给药24h后采集各大鼠动脉血，检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、间接胆红素(Ibil)、直接胆红素(Dbil)、总胆红素(Tbil)、总胆汁酸(TBA)。R值计算(R=ALT正常值的倍数/ALP正常值的倍数)。 2.2ELISA试剂盒检测血清TNF—α。 2.3肝脏标本病理学观察： 给药24h后取大鼠肝脏组织，HE染色，光学显微镜下观察病理改变并照片。 3.实验数据处理实验测得所有数据均以平均值±标准差来表示，两组间比较用t检验；多组间比较用方差分析，方差齐时两两检验用LSD—t检验，方差不齐用Games—Howell，以P<0.05为差异有统计学意义。 结果: 1.肝功生化、TNF—α的改变及R值计算以A组的肝功牛化值和TNF—α浓度平均数为正常值。 B组(益赛普组)和A组(空白对照组)比较，血清肝功生化值和TNF—α水平无明显改变，t检验均无统计学意义。 C组(对乙酰氨基酚组)和A组(空白对照组)比较，TBA升高无统计学差异，余生化指标和TNF—α显著升高，有统计学意义差异；ALT>正常值的2倍，Rc=2.52±0.31，Rc95％置信区间(2.31，2.74)。D组(对乙酰氨基酚+益赛普组)与C组(对乙酰氨基酚组)比较，ALP、TBA改变无统计学差异，余生化指标和TNF—α显著降低，两组之间有统计学差异。D组(对乙酰氨基酚+益赛普组)和A组(空白对照组)比较，TBA、Tbil、Dbil、Ibil升高无统计学差异，ALP、ALT、AST、TNF—α升高有统计学差异。 E组(氯丙嗪组)和A组(空白对照组)比较，血清肝功生化值显著升高，TNF—α显著降低，两组之间存在显著性差异；ALP>正常值的2倍，且RE=1.77±0.25，RE95％置信区间(1.59，1.95)。F组(氯丙嗪+益赛普组)与E组(氯丙嗪组)相比，血清肝功生化值和TNF—α水平无明显改变，t检验均无统计学差异。F组(氯丙嗪+益赛普组)和A组(空白对照组)比较，TNF—α水平降低，肝功生化指标升高，均有统计学差异。 2.病理表现 A组(空白对照组)：肝索结构清晰，小叶结构完整。B组(益赛普组)：少量炎性细胞浸润，偶可见点状坏死，未见灶性及大片状坏死，肝小叶结构清晰。C组(对乙酰氨基酚组)：轻者表现为肝细胞点状坏死，重者表现肝小叶中央实质细胞碎片状坏死、脂肪变性，广泛的炎性细胞浸润，可见新生肝细胞。D组(对乙酰氨基酚+益赛普组)大致同C组。E组(氯丙嗪组)肝细胞可见胆汁淤积，淋巴细胞浸润，肝细胞点状坏死。F组(氯丙嗪+益赛普)大致同E组。 结论: 1.本实验使用对乙酰氨基酚和氯丙嗪，分别复制急性肝细胞型和急性肝内淤胆型肝损伤动物模型成功。 2.TNF—α的表达在对乙酰氨基酚导致的急性肝细胞型肝损伤中明显升高，阻断TNF—α后，肝功生化较前有显著改善，病理改变不明显，提示TNF—α可能参与对乙酰氨基酚所致肝损伤。 3.TNF—α的表达在氯丙嗪引起的急性肝内淤胆型肝损伤中显著下降，提示TNF—α可能不参与氯丙嗪所致肝损伤。