脱落酸和乙烯利对葡萄花色苷生物合成相关基因表达的影响

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以‘京优’(Jingyou)葡萄为试验材料,研究脱落酸(ABA)和乙烯利处理对葡萄果实品质的影响。利用荧光定量PCR技术分析了与花色苷生物合成相关的14个结构基因和2个调节基因在植物生长调节剂处理下的mRNA转录水平。采用RT-PCR、SMARTTMRACE技术首次从‘京优’葡萄中克隆了GST基因的cDNA全长序列,并对其进行序列和转录特征分析。结果如下:1、实验结果证明乙烯利和ABA处理都有促进果实软化、有机酸降解、花色苷积累,促进果实成熟的作用。乙烯利软化果实的效果明显好于ABA,但是促进果实可溶性固形物的积累效果弱于ABA。2、不同浓度ABA和乙烯利促进果实成熟实验结果表明,600mg/L ABA处理催熟效果最佳,可以使果实提前13-16天成熟,而且各种生理指标都可满足商业要求;300 mg/LABA和乙烯利处理,催熟效果不明显,仅能使果实提前3-6天成熟;高浓度的乙烯利处理(600 mg/L和900 mg/L)可以有效的促进果实成熟,但是会导致裂果和落果等问题,破坏果实的品质。3、葡萄果实发育进入着色期,花色苷合成过程中类黄酮途径的主要相关基因(CHSs、CHIs、F3Hs、F3’H、F3’5’H、DFR、LDOX、UFGT、OMT和GST)和转录因子(MybA1和MybA1-2)转录水平都显著升高,其中CHSs、CHIs和F3Hs基因家族中的CHS2和CHS3、CHI1和F3H2的转录与花色苷合成紧密相关,UFGT、GST、MybA1、MybA1-2随花色苷合成而大量转录。4、ABA和乙烯利处理能够增强花色昔合成相关基因的转录,使转录时期前移和转录水平提高,乙烯利和ABA对OMT、UFGT和GST转录的促进作用明显,但是乙烯利处理对CHSs、F3Hs、DFR、LDOX转录的促进作用弱于ABA处理。5、花色苷和其合成影响因子相关性分析表明,花色苷合成与浆果的可溶性固形物含量,花色苷合成相关基因(CHS2、CHS3、CHI2、CHS2、F3H2、F3’H、F3’5’H、DFR、LDOX、UFGT、GST和OMT)和转录因子(MybA1和MybA1-2)的转录水平呈显著或极显著正相关;与可滴定酸含量呈负相关;花色苷合成和CHS1、F3H1的转录没有相关性。6、应用RT-PCR、SMARTTMRACE技术从‘京优’葡萄中克隆了GST基因的cDNA序列,命名为VJyGST (Genbank的登录号:GU370062),全长为851bp。GST基因序列分析表明,开放阅读框(ORF) 642 bp,编码213个氨基酸,氨基酸序列的分子量为24.25kDa, GST有较高的保守性,氨基酸同源性分析表明,VJyGST与山葡萄GST(FJ645770)、甜桔GST (DQ198153)、荔枝GST (EF613493)相似性分别达到了99%、77%、67%。7、GST在不同着色时期果肉和果皮中转录特征分析表明,GST在果肉中和果皮中的转录有明显差异,果肉中的各个着色期转录都较少,变化不明显;在果皮中着色前期转录较少,着色中后期随花色苷合成的增加,迅速上调转录,证明了GST转录与花色苷积累密切相关。
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