目的:　　 QseC是大肠杆菌中一个重要的群体感应调节因子,在信号分子AI-3及肾上腺素／去甲肾上腺素的作用下可以启动一系列基因的表达。基因组序列分析显示,伤寒沙门菌中存在有qseBC同源基因,本研究拟观察伤寒沙门菌qseC同源基因的功能及在是否含有葡萄糖条件下对基因表达的系统调节作用。　　 方法:　　 1.基因缺陷变异株的制备:采用自杀质粒pGMB151介导的同源重组方法,制备伤寒沙门菌qseB、qseC同源基因的单缺陷及qseB／qseC双缺陷变异株。　　 2.qseB、qseC基因缺陷回补株的构建:PCR扩增目的基因,与表达载体pBAD／gⅢ定向连接后,转化到大肠埃希菌DH5α中筛选阳性质粒,经序列分析鉴定后,转入相应的基因缺陷变异株中。　　 3.生长曲线的测定:以生长时间为横坐标,细菌OD600值为纵坐标绘制野生株与缺陷株生长曲线。　　 4.动力试验分析:分别在是否含有0.5％葡萄糖的LB半固体培养基中培养细菌,观察野生株及缺陷株的动力情况。　　 5.伤寒沙门菌基因表达谱分析:分别在是否含有葡萄糖的条件下培养野生株与qseC基因缺陷变异株至OD600值为1.0,收集菌体、提取总RNA、反转录成cDNA并标记荧光(cy3或cy5),与伤寒沙门菌全基因组芯片杂交,双通道扫描后根据荧光信号分析各基因转录表达水平,比较伤寒沙门菌野生株和qseC基因缺陷变异株基因表达谱差异。　　 6.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析:选择基因芯片结果中部分差异表达基因,设计特异性引物,进行反转录和实时定量PCR,验证DNA芯片分析结果。　　 7.HeLa细胞侵袭试验:将在含0.5％葡萄糖生长条件下培养至OD600为1.0左右的细菌,加入培养有HeLa细胞的24孔板中(MOI=20),90 min后收集一部分细胞,加入裂解液,涂LB平板过夜培养,计细菌克隆数,代表细菌粘附细胞水平T0；另一部分加入庆大霉素杀死胞外细菌,继续培养90 min,破胞后涂板过夜培养,计克隆数代表细菌的侵袭水平T90,用T90／T0的值代表细菌的侵袭力。　　 结果:　　 1.经PCR及序列分析证实qseB、qseC及qseB／qseC基因缺陷变异株中分别缺失了264,690及954个碱基,表明成功构建伤寒沙门菌qseB、qseC及qseB／qseC基因缺陷变异株。　　 2.PCR及序列分析结果表明,成功构建pBAD-qseB及pBAD-qseC阳性重组载体,并成功将重组载体导入相应的缺陷株中,制备成qseB、qseC各基因缺陷回补株。　　 3.生长曲线结果表明qseC基因缺陷变异株在是否含有葡萄糖条件下生存能力均与野生株相似。在葡萄糖条件下,野生株与缺陷株的生长均比不加葡萄糖条件下快。　　 4.动力试验结果显示,在是否含有葡萄糖情况下,qseC基因缺陷变异株动力均比野生株明显下降,回补qseC基因后动力有所恢复；qseB缺陷变异株与qseB／qseC双缺陷变异株动力与野生株相比均无明显差异。　　 5.基因芯片分析结果显示,在普通条件下,伤寒沙门菌qseC基因缺陷变异株相比野生株,有13个基因表达上调,6个基因表达下调,主要涉及qseC侧翼基因、酶类基因等；在含葡萄糖条件下,qseC基因缺陷变异株中有26个基因表达上调,14个基因表达下调,差异表达基因包括SPI-1相关基因,qseC侧翼基因,酶类基因等。　　 6.实时荧光定量PCR分析基因表达差异结果,一方面进一步支持了基因芯片分析结果,另一方面还显示QseB能促进qseC侧翼基因的表达。　　 7.在含葡萄糖环境下,qseC基因缺陷变异株的侵袭力比野生株下降约4倍,而qseC回补株与野生株相比无明显差异。　　 结论:　　 伤寒沙门菌中QseC对其侧翼基因的表达,动力具有调节作用,同时在葡萄糖条件下,上调SPI-1侵袭相关基因的表达,促进细菌的侵袭。