细丝蛋白B(Filamin B,FLNB)由第3号常染色体上的基因编码,是细胞骨架蛋白,它与肌动蛋白交联形成三维细胞骨架网络并维持细胞形态,在细胞中参与多种生理生化活动,包括转录调控和细胞增殖等。近年来的研究表明,细丝蛋白A和细丝蛋白B在肿瘤发生、骨骼疾病、细胞迁移以及粘附过程中起关键作用;本实验室以前的研究表明,细丝蛋白A(FLNA)能够抑制RNA聚合酶Ⅰ(PolⅠ)指导的基因转录,并且通过细胞特异性的调节方式抑制RNA聚合酶Ⅲ(PolⅢ)指导的基因转录,进而抑制细胞增殖。由于FLNB和FLNA都属于细丝蛋白家族,初级结构上具有80%的同源性,且在细胞内共定位,因此,在本课题中,我们试图了解FLNB是否也参与PolⅠ和PolⅢ基因转录过程并影响细胞的增殖和迁移功能。为了完成以上研究目标,首先,我们制备了FLNB sh RNA慢病毒表达系统,利用制备的慢病毒表达颗粒侵染293T和He La细胞并筛选出FLNB sh RNA稳定表达细胞系。利用RT-q PCR分析这些细胞系中PolⅠ和PolⅢ指导的基因转录,结果表明,FLNB敲低能够显著降低所检测的一部分基因的RNA表达水平;提示FLNB是PolⅠ和PolⅢ指导的基因转录所需要的。为了确定这一发现,利用293T和He La细胞过表达FLNB,结果表明,FLNB过表达显著增加核糖体RNA,U6sn RNA以及7SL RNA表达水平。这些结果证明FLNB是维持PolⅠ和PolⅢ正常基因转录所必需的。由于FLNA敲低能促进细胞中PolⅠ和PolⅢ基因转录,因此,在FLNB敲低的基础上再次敲降FLNA是否挽救因FLNB敲低导致的基因表达抑制,利用FLNB-FLNA双敲低细胞系以及q PCR方法,数据表明,一部分受FLNB敲低抑制的基因的表达水平有不同程度的上调。这一结果提示FLNB与FLNA在调控PolⅠ和PolⅢ基因转录功能上起着相反的作用。由于PolⅠ和PolⅢ基因转录和细胞增殖密切相关,因此,我们试图确定FLNB表达水平的改变是否影响细胞增殖。通过对上述细胞株在不同时间进行细胞计数和MTT实验发现,FLNB敲低抑制细胞增殖,而FLNB过表达则促进细胞的增殖。FLNB是否调节细胞的迁移还不清楚,因此我们通过细胞划痕和Transwell实验分析FLNB表达水平的改变对上述细胞迁移能力的影响。结果表明,FLNB敲低抑制细胞迁移,而FLNB过表达促进细胞迁移。进一步对FLNA敲低细胞系及FLNB-FLNA双敲低细胞系的增殖和迁移功能的分析表明,在293T、He La细胞中,FLNA与FLNB在调控细胞增殖和迁移功能上起相反的作用;FLNA抑制细胞增殖和迁移,而FLNB促进细胞增殖和迁移。与FLNB敲低细胞系相比,虽然FLNB-FLNA双敲低细胞系的增殖水平表现出一定程度升高,但双敲低细胞系的迁移能力则表现出的下降趋势。这一结果显示,当同时敲低293T、He La细胞中的FLNB后再敲低FLNA,FLNA在细胞迁移方面起正调控作用,提示FLNA对细胞迁移的调节作用依赖于FLNB的表达。综合以上数据,本课题发现,FLNB是维持细胞PolⅠ和PolⅢ正常基因转录、细胞增殖和细胞迁移所必需的,而FLNA对细胞迁移的调节取决于FLNB是否表达。这些发现对我们进一步探索FLNB对基因转录和细胞迁移的调节机制奠定了基础。