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目的:1.检测白细胞介素-18(interleukin,IL-18)在博莱霉素(BLM)诱导大鼠肺纤维化模型中的表达;2.体外分离培养大鼠肺成纤维细胞,研究重组大鼠白细胞介素18(rrIL-18)对肺成纤维细胞的作用及机制,以探讨IL-18在肺纤维化的形成和发展进程中所起的作用。方法:1.健康雌性SD大鼠60只,随机分两组,每组30只。实验组:气管内一次性注入生理盐水稀释的BLM(5mg·kg-1);对照组:气管内注入生理盐水(0.2~0.3ml)。于给药后第1、3、7、14、28天用过量氯胺酮腹腔注射的方法随机处死实验组及对照组大鼠各6只。无菌操作下取出大鼠肺组织,RT-PCR法检测肺组织中IL-18 mRNA表达,免疫荧光法检测肺组织IL-18蛋白的表达及定位;2.体外分离培养新生大鼠肺成纤维细胞,RT-PCR法检测正常肺成纤维细胞IL-18的基因表达;采用MTT法检测rrIL-18对成纤维细胞增殖反应的影响;半定量RT-PCR法检测rrIL-18干预前后成纤维细胞中Ⅲ型胶原蛋白、TNF-a、MMP9、IL-13的表达变化。结果:1.肺纤维化模型复制成功;IL-18基因表达相对灰度值在造模后不同时期与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),各个时期之间比较差异有统计学意义(P<0.01)。在肺纤维化形成过程中,实验组中的IL-18的基因和蛋白表达呈现出如下趋势:自BLM注入后第1天开始迅速升高,至第7天到达高峰,以后逐渐下降,但第28天仍高于正常。在对照组肺泡上皮细胞、肺泡巨噬细胞和小血管内皮细胞中有少量表达,在纤维化肺组织的大多数细胞中表达显著增高,且纤维化严重区域较多成纤维细胞也呈阳性反应。2.成功培养大鼠肺成纤维细胞;正常细胞未检测到IL-18 mRNA表达,但IL-18能促进肺成纤维细胞增殖,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);IL-18干预早期显著增强成纤维细胞表达Ⅲ型胶原、TNF-a mRNA,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);IL-18不能诱导成纤维细胞表达MMP9和IL-13 mRNA。结论:1.IL-18是肺纤维化过程中的前炎症因子,在纤维化的发生、发展的病理过程中起重要作用,在前期的肺泡炎阶段可能促进炎症的发展,并可能直接参与肺纤维化的形成。2.IL-18参与肺纤维化形成的机制与促进成纤维细胞增殖及胶原沉积有关。3.TNF-a在IL-18介导肺成纤维细胞增殖中是主要细胞因子之一。