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目的分离、培养脊髓损伤后激活的星形胶质细胞,探索反应性星形胶质细胞培养体系,研究反应性星形胶质细胞的干细胞特性,为脊髓损伤后神经修复提供新的途径;方法SD大鼠行Allen’s打击法脊髓损伤模型制备后一周,切取脊髓组织,以补充表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子及B27的DMEM/F12细胞培养基对激活的星形胶质细胞原代培养;切取正常大鼠脊髓,以DMEM/F12细胞培养基培养正常星形胶质细胞,再行划伤诱导反应性星形胶质细胞生成;分别在第三代上述培养的反应性星形胶质细胞的培养基中添加BrdU并免疫荧光鉴定其增殖情况;对培养至第三代反应性星形胶质细胞行nestin/GFAP细胞免疫荧光双标鉴定;分别对培养至第三代反应性星形胶质细胞进行诱导分化培养并应用细胞免疫荧光鉴定分化后细胞表达GFAP、MAP-2及RIP情况;Western Blot鉴定划痕后细胞表达nestin及GFAP;结果原代培养的正常星形胶质细胞可贴壁生长,原代培养的反应性星形胶质细胞可悬浮于培养基中生长;培养至第三代反应性星形胶质细胞在其培养基中添加BrdU后可见其表达,免疫荧光双鉴定显示直接由体内分离培养的以及划痕诱导培养出的第三代反应性星形胶质细胞表达nestin+/GFAP+;对体内分离培养的反应性星形胶质细胞诱导分化后免疫荧光鉴定显示大部分细胞表达GFAP、少量细胞表达MAP-2及RIP;通过划痕诱导产生的反应性星形胶质细胞诱导分化后细胞免疫荧光显示大部分细胞表达GFAP、部分细胞表达RIP,但未见明显MAP-2及RIP表达;Western Blot鉴定划痕后不同时间点的反应性星形胶质细胞表达GFAP及nestin,一周内随时间延长,nestin表达增加,GFAP表达增加;结论脊髓损伤后星形胶质细胞可被激活产生反应性星形胶质细胞,反应性星形胶质细胞可表达干细胞的特异性标志物nestin及星形胶质细胞的特异性标志物GFAP;诱导分化后产生星形胶质细胞、神经元和少突胶质细胞,说明反应性星形胶质细胞可能获得了神经干细胞的特性,可能为脊髓损伤的临床治疗提供一个新的途径;