微小RNA(MicroRNA,miRNA)是一类碱基数目在19-23个左右的内源性的非编码的小分子单链RNA,广泛存在于动植物以及病毒体内。大量的研究结果表明,miRNA与生物体的多种生理过程密切相关,包括生长发育、细胞增殖和调亡、脂肪代谢、肿瘤发展等。某些特定miRNA的异常表达与人类疾病的发生直接相关。因此,高灵敏检测特定的miRNA具有重要的研究意义。由于miRNA在细胞中的表达丰度低、序列同源性高,对分析方法的灵敏度提出了极高的要求。通常的策略是采用核酸扩增技术放大检测信号以提高miRNA检测的灵敏度。基于核酸扩增的检测方法需要使用昂贵的酶等材料,还需要复杂的序列设计及对实验条件和实验环境的严格控制。以上的这些需求,不仅对检测操作提出较高的专业性要求,同时延长了检测周期,增加了检测成本。建立无需核酸扩增操作的高灵敏miRNA检测新方法具有确切的研究意义和应用价值。本论文内容如下:第一章为综述,简单介绍了 miRNA的研究背景,包括miRNA的起源、作用机制以及miRNA与疾病的关系。随后对基于直接核酸杂交技术检测miRNA方法和基于信号放大技术检测miRNA方法进行概述。最后陈述了本论文的研究背景及研究内容。第二章建立了一种基于水溶性荧光聚合物实现信号放大直接检测目标miRNA的新方法。该方法无需对目标miRNA进行扩增,检测成本和专业要求低,操作步骤简单,分析速度快。其原理为,将丙烯酰基荧光素、丙烯酰基修饰的DNA(Acrydite-DNA)序列及丙烯酰胺共聚,得到标记多个荧光素、可以识别miRNA的水溶性荧光聚合物。由于该聚合物链平均标记86个荧光素基团,可有效实现检测信号的第一级放大,同时,荧光报告基团受到聚合物的包裹和保护,降低了碰撞猝灭,实现了检测信号的第二级放大。通过在金磁微粒的表面自组装巯基化的DNA(SH-DNA)序列,对目标miRNA实现选择性分离,大大简化了检测操作。实验结果表明,对miRNA-21的检出限为1.44fM,灵敏度与已有的大多数基于扩增技术检测方法相近;同时考察了目标序列为单碱基错配、三碱基错配、完全错配时的荧光强度,实验结果表明,新方法对目标miRNA具有良好的选择性。第三章合成了一种新型的强荧光蛋白染色剂,该染色剂的结构含有醛基,可以与蛋白质的氨基反应,形成共价键,使得染色牢固,不易脱色,有利于荧光或裸眼识别与检测。利用该染色剂对牛血清白蛋白和溶菌酶进行了染色。与传统的考马斯亮蓝及银染方法进行了比较。在电泳前将新染色剂与蛋白质样品混合,使染料与蛋白质结合;电泳后直接观测蛋白质区带,具有使用方便、操作步骤少、节约时间、灵敏度高的优点。第四章全文总结。本论文构建了一种基于水溶性荧光聚合物直接检测miRNA的新方法,并对不同碱基序列的miRNA进行了检测,说明该方法具有好的选择性。同时,我们合成了一种新的荧光蛋白染色剂,并将该染色剂成功的应用于蛋白质的染色。