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本研究以分离具有杀虫活性的附子二萜生物碱化合物为目标,采用优化的工业化提取、分离纯化方法体系,以获得可大量制备的二萜生物碱化合物单体。研究确定了乌头生物碱的优化粗提工艺条件为3倍95%乙醇溶剂浸泡3次,提取率达96%。对工业化树脂纯化工艺进行研究,筛选出了X—5、AB—8、D—101三种适合生物碱纯化的树脂,确定三种树脂的最佳吸附和洗脱率,以及最佳上样条件6g/L,pH4.5,18℃。确定了10%乙醇溶液和95%乙醇溶液洗脱乌头总碱时的不同特点。
在生物碱主要单体的分离纯化中,确定了最佳的酸水提取条件,石油醚脱脂以及氯仿萃取的比例和次数,在最大限度的得到生物碱的同时使用最少数量的溶剂用量。确定适合的硅胶型号,通过硅胶柱层析和结晶操作,得到纯度达到95%以上的中乌头碱和附子灵分别为15.72g和7.89g,并且还得到了宋果灵单体0.72g。对于得到的单体进行紫外,质谱,NMR等鉴定,确定得到的化合物为中乌头碱、附子灵、宋果灵。
在杀虫活性测试中,采用丙酮、丙酮甲醇混合液和DMSO为溶剂,分别对附子乙醇提取物、总生物碱、中乌头碱和附子灵进行杀虫活性测试,对3龄黏虫24h校正死亡率最高为16.7%。确定了DMSO作为溶剂时,有最好触杀效果。DMSO作为溶剂时,不同浓度中乌碱48h触杀活性随浓度增加而增加,在最大浓度1.25 mg/mL下,48h校正死亡率83%,毒力回归曲线y=2.0044x+3.5908,R2=0.9485,LC50=0.504mg/mL。胃毒活性测定时,发现其对黏虫的胃毒活性甚微。