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Toll样受体(TLRs)是一个重要的模式识别受体(PRRs)家族,几乎分布于所有的多细胞生物中。当机体遭遇病原微生物的侵袭,TLRs能够快速识别病原体相关分子模式(PAMPs),激活下游的信号通路,诱导相关的促炎性因子及干扰素表达,从而激活天然免疫反应与介导特异性免疫应答反应抵御病原。目前,禽TLRs已被鉴定的至少有10种,其中,TLR3/5/7均与哺乳动物同源且功能类似。TLR3和TLR7分布在细胞内,分别识别dsRNA和激动剂poly(I:C);ssRNA和喹啉咪唑派生物,在抗病毒的免疫应答过程中都发挥重要作用。而TLR5分布在细胞表面,主要识别细菌鞭毛蛋白,在抵御细菌类微生物感染中有重要作用。然而,目前禽TLRs的研究主要集中在家禽,关于野生鸟类相关TLRs的研究则鲜有报道。野鸭作为许多重要禽类病毒的储存库,对许多病原具有较强的耐受能力,而TLRs与抗病毒天然免疫机制密切相关,因此,通过TLRs探究野鸭复杂的抗病毒机制,对家禽疾病的防控可能有重要意义。本研究根据禽TLR3/5/7基因的保守序列设计特异性引物,首次克隆了野鸭(绿头鸭)TLR3、5、7的0RF全长基因,分别为:2688bp,编码895个氨基酸;2580bp,编码859个氨基酸;3144bp,编码1047个氨基酸。SMART程序蛋白结构域预测显示TLR3/5/7均具有典型的TLRs家族结构特征,而各基因之间胞外区LRRs的结构差异显著。DNAStar基因序列及氨基酸同源性分析显示,野鸭TLR3/5/7基因与鸟类、鱼类、哺乳类同源规律类似,由高到低分别为鸟类、哺乳类和鱼类。运用MrBayes v.3.2程序建树发现,TLR3/5/7基因在鸟类、哺乳类、鱼类各物种间进化关系趋同,且在同类物种中进化关系高度保守。此外,本研究运用荧光定量PCR技术,建立了野鸭TLR3、TLR5、TLR7的荧光定量PCR检测方法,且充分验证了其稳定性与特异性。并利用荧光定量PCR对不同种类野鸭各组织脏器中的TLR3/5/7分别进行相对定量分析,结果发现野鸭物种中的表达量均高于家鸭(麻鸭),而各基因在脾脏中表达量普遍较高。单因素方差法分别对不同种类野鸭同种组织和不同组织进行了表达差异显著性分析显示:在不同野鸭物种和家鸭(麻鸭)中,TLR5与TLR7表达差异性较TLR3更显著。本研究成功克隆了野鸭Toll样受体3、5、7的全长基因,利用生物信息学方法对每个TLRs基因进行了初步探究,并建立了高效特异的荧光定量检测方法,揭示了 TLRs各亚家族在几种野鸭体内相同和不同组织脏器中的表达差异显著关系,丰富了我们对野鸭TLRs的认识,为深入探索野鸭复杂的抗病毒机制提供了理论支持。