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第一部分稳定遗传性高钙尿性结石大鼠模型的建立及其生物遗传特性目的建立能够稳定遗传的遗传性高钙尿性结石大鼠模型,了解其生物遗传特性,积累建立大鼠遗传模型的经验。方法将雌雄各40只SD大鼠分置于鼠代谢笼,连续收集两个24小时尿液并测定尿钙,选取有最大尿钙值的各3-4只雄、雌大鼠繁殖传代,了解每一代鼠的遗传及代谢变化。结果GHS鼠的构成比从第四代起有明显的增加(37.5%),从第七代开始,超过90%以上的子代鼠尿钙的排泄均能达到GHS鼠的水平(≧1.5mg/24 h)。第七代模型鼠93%(14/15)的雄鼠和92%(12/13)的雌鼠两个24h尿钙排泄均高于对照组2个标准差((1.12+0.36)*mg/d,(1.15+0.24)▲mg/d)以上,两组尿钙相比有显著性差异(F*=27.10,P*<0.01;FA=21.16,P▲<0.01)。检测血清中钙、磷及1,25(OH)2D3等指标,两组相比均无明显差别(F<2.22,P>0.05)。结论本研究成功地建立了遗传性高钙尿性结石大鼠模型。遗传性高钙尿性结石(GHS)模型鼠从第四代开始表现出一定的遗传倾向;从第七代开始,其各种特性能被稳定的遗传。由于GHS大鼠具有和人类特发性高钙尿症(IH)相同的病理生理改变,因此它是研究IH发生和尿石形成机制的一种很好的动物模型。第二部分遗传性高钙尿性结石大鼠十二指肠维生素D受体mRNA及蛋白的表达目的研究遗传性高钙尿性结石大鼠十二指肠维生素D受体(VDR)mRNA及蛋白的表达。方法采用半定量RT-PCR方法及Western blot法检测6例遗传性高钙尿性结石(GHS)大鼠及6例正常尿钙对照(NC)大鼠十二指肠维生素D受体mRNA及其蛋白的表达。结果遗传性高钙尿性结石大鼠十二指肠维生素D受体mRNA的表达同正常大鼠相比无明显差别(P>0.05),但其VDR蛋白的表达则显著高于正常大鼠(P<0.05)。结论遗传性高钙尿性结石大鼠十二指肠粘膜维生素D受体蛋白的表达增强,这可能与GHS鼠十二指肠对钙的高吸收密切相关。在VDR蛋白的合成过程中可能存在着翻译水平的调控机制。第三部分遗传性高钙尿性结石大鼠维生素D受体mRNA的稳定性研究及维生素D对VDR mRNA表达的影响目的研究遗传性高钙尿性结石(GHS)大鼠十二指肠维生素D受体(VDR)mRNA的稳定性及维生素D对VDR mRNA表达的作用。方法半定量RT-PCR方法检测维生素D用药前后各5例遗传性高钙尿性结石(GHS)大鼠和正常对照(NC)大鼠十二指肠VDR mRNA的表达。采用放线菌素D转录终止法测定VDR mRNA的半衰期。结果遗传性高钙尿性结石大鼠十二指肠VDR mRNA的表达在维生素D用药前同正常大鼠相比无明显差别(P>0.05),但维生素D用药6h后其VDRmRNA的表达在两者间有显著性差异(P<0.05)。GHS大鼠VDR mRNA的半衰期较NC大鼠明显延长。结论维生素D可以促进遗传性高钙尿性结石大鼠十二指肠VDR mRNA的表达。GHS大鼠维生素D受体mRNA的半衰期延长,稳定性增强。第四部分大鼠维生素D受体蛋白表达载体的构建及GHS大鼠十二指肠VDR cDNA序列分析目的构建大鼠维生素D受体(VDR)蛋白表达载体,测定并分析遗传性高钙尿性结石(GHS)大鼠VDR cDNA序列。方法采用半定量RT-PCR方法扩增含VDR蛋白编码基因序列,将扩增产物克隆至真核表达载体pcDNA3.1/Zero(+),对5只GHS大鼠和4只正常尿钙对照(NC)大鼠十二指肠VDR cDNA序列进行测序分析。结果琼脂糖凝胶电泳示PCR扩增产物碱基数目与目的片段大小一致。对重组质粒的分析表明,插入片段的序列与发表的VDR基因编码序列一致。5只GHS鼠和4只NC鼠肠VDR cDNA序列均有3个相同的位点不同于已公布的大鼠肠VDR cDNA序列:在256bp位点:C取代G;569bp位点:G代替A;1658位点:A替代G。另外,GHS鼠在1795bp位点发生改变,G取代A,而NC鼠则无改变。结论大鼠维生素D受体蛋白编码序列被成功地克隆至表达载pcDNA3.1/Zero(+)上。GHS大鼠基因编码区的序列组成同NC大鼠相一致,但GHS鼠1795bp位点的碱基改变未见于NC鼠。