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RNA干扰(RNA interference,简称RNAi)技术已被开发利用于害虫控制,但具体的应用技术还有待进一步研究。本论文尝试在苏云金芽孢杆菌(Bt)中表达小菜蛾精氨酸激酶基因(PxAK)的dsRNA,通过Bt介导来沉默小菜蛾上的PxAK,达到杀虫的目的,以期为RNAi技术在小菜蛾防治中的应用提供新的途径。具体研究内容与结果如下：PxAK氨基酸序列的分析结果表明,PxAK与家蚕、棉铃虫、斜纹夜蛾等14种鳞翅目昆虫的精氨酸激酶(AK)一致性达91%-95%,与其他目昆虫的同源性也都在81%以上。推断了基因保守区域并以其中的325bp片段(AKi)作为RNAi的靶标。克隆Bt的启动子序列pro3a,在其后连接上AKi,然后连接到质粒pHT304上,最后把启动子pro3a反向连接到AKi的另一端,得到质粒pHT304+pro3a(+)+AKi+pro3a(-),命名为pHTAKR。利用重叠延伸PCR技术突变pHTAKR中来自质粒pHT304的Sph Ⅰ酶切位点,从而获得只有单个SphⅠ酶切位点的载体pHTAKR2。利用电穿孔技术把载体pHTAKR2分别转入BtBMB171和Bt8010,获得工程菌BMB171-AKi和8010-AKi。经检测,工程菌8010-AKi中存在晶体蛋白,但晶体数量比Bt8010少,且形状由菱形为主转变成菱形、方形、椭圆形等多种形状并存；工程菌8010-AKi的生长速率在对数期比菌株8010慢,形成的芽孢数也少；在经选择压处理的工程菌8010-AKi中,30代内外源质粒pHTAKR2的稳定性都在90%以上。用Bt菌液浸泡处理的叶片喂饲小菜蛾,发现工程菌8010-AKi处理的小菜蛾幼虫在两天后开始出现死亡,第六天死亡率达60%,死亡个体主要出现体节皱缩,胸部扁缩等由于AK被抑制后的形态,但比8010的死亡率低；工程菌BMB171-AKi处理的幼虫第六天死亡率达53.3%,比BMB171的死亡率高,其死亡个体也出现了体节皱缩等由于AK被抑制后的形态,而无因Bt毒蛋白而死亡的形态。工程菌8010-AKi干扰后的实时荧光定量PCR结果表明,经过处理的小菜蛾幼虫,其PxAK表达被抑制。这意味着采用工程菌介导对小菜蛾幼虫进行RNAi是有效。本研究首次利用Bt介导RNA干扰,通过喂饲小菜蛾来抑制PxAK的表达,从而影响小菜蛾的生长发育。如此可见,把杀虫微生物和RNAi技术相结合是可行的。