本研究目的是建立RQ-PCR(real-time quantitative PCR)检测大肠杆菌(Escherichia coli．E．coli)DNA的方法并初步用于临床血标本检测。以大肠杆菌β-右旋半乳糖苷酶基因为靶基因设计引物和探针，制备重组质粒标准品，对26份外科发热患者血及其他体液标本定量检测。结果显示引物和探针特异性好，样本检测平均准确性为(112.19±7.48)％；批内及批间重复性平均变异系数分别为(16.33±4.8)％和(16.03±7.8)％。通过40例健康志愿者静脉全血检测人为制定出阳性检出限为16拷贝／反应孔。31例外科发热患者74份血标本的大肠杆菌阳性检出率，培养为2.78％(2／72)，RQ-PCR为51.35％(38／74)，差异显著(P＜0.01)。大肠杆菌DNA含量与体温和心率相关性显著(P＜0.01)，密切程度中等(r值为0.57及0.43)；与白细胞计数、中性粒细胞比例和淋巴细胞比例间相关性不显著(P＞0.05)。结果示所建立的RQ-PCR检测大肠杆菌DNA的方法学具有快速、灵敏、特异、污染小、重复性好的优点，检出率优于血培养，可初步用于临床各类体液标本中大肠杆菌DNA检测，能及时准确反映大肠杆菌血症严重程度，有助于对肠屏障损伤导致肠道细菌移位的动态程度或后果进行更准确、快速、敏感且有效的评估。