以酪蛋白为原料,进行碱性蛋白酶水解制备酪蛋白磷酸肽(CPP)的条件优化,同时对CPP螯合亚铁的螯合条件进行优化。DEAE-52纤维素阴离子交换层析法分离酪蛋白水解液,将分离得到的几种峰样品分别与Fe2+螯合,得到与Fe2+螯合率高的峰样品。超滤法分离酪蛋白水解液,将分离得到的不同分子量段的多肽分别与Fe2+螯合,得到与Fe2+螯合率高的集中肽段区域。为进一步的纯化奠定基础。　　1.响应曲面法优化CPP的制备　　采用Plackett-Burman设计法和响应面分析法相结合,以CPP得率作为指标,进行碱性蛋白酶水解酪蛋白的条件优化。结果表明,底物浓度、温度和pH是影响CPP得率的主要因素。最佳水解条件为温度55℃、底物浓度16％、pH10.8、酶底比1.5%,水解时间4.5h,在此条件下,CPP得率可达33.2mg/mL。　　2.响应曲面法优化CPP螯合亚铁的制备　　根据单因素试验和响应曲面设计的中心组合试验的结果,螯合的最优条件为:温度48℃、pH7.0、时间3.5h、物料比25:1,在此条件下螯合率为71.16%。　　3.离子交换层析法分离酪蛋白水解液　　以DEAE-52纤维素为离子交换介质,确定了缓冲溶液pH8.0和流速1.5ml/min的层析条件,在214nm处采用分步洗脱的方式,得到1个穿透峰和5个洗脱峰,分别与Fe2+螯合,得到与Fe2+螯合率高的峰为洗脱峰2。　　4.超滤法分离酪蛋白水解液　　将酪蛋白水解液稀释3倍,依次用3种规格的超滤离心管(10KD、5KD、3KD)进行离心分离,将样品分为4个不同肽段:>10KD、5-10KD、3-5KD和<3KD,分别和Fe2+螯合,得到与Fe2+螯合率高的集中肽段区域为5KD以上。