蛋白质含量是婴幼儿配方乳粉中最重要的指标,测定这一指标的国家标准方法是经典的凯氏定氮法(Kjeldahl method),即测定样品总氮并折算出粗蛋白含量。该法不能区分氮的来源,存在被掺入含氮量高的非蛋白物质冒充合格产品的风险。通过沉淀蛋白质处理后再用凯氏定氮法,可测定样品中非蛋白氮含量,辅助判定产品是否掺假。本课题在婴幼儿配方乳粉中模拟掺入三聚氰胺,探讨蛋白质沉淀剂对测定非蛋白氮含量标准方法的影响因素,建立新的改进方法,并在实际检测中应用验证。主要结果如下:1.蛋白质沉淀剂的比较与筛选比较不同蛋白质沉淀剂(三氯乙酸、丙酮、乙酸铅和草酸钾-磷酸氢二钠、乙酸锌溶液和亚铁氰化钾)的分离效果,发现三氯乙酸沉淀法相比其它方法操作步骤更少,计算公式更精准,结果的准确度和稳定性更好。实验还发现,用超声辅助溶解方式替代搅拌,可确保样品完全溶解。2.三氯乙酸沉淀法的改进和最适条件实验结果表明,10 mL 15%三氯乙酸可沉淀约0.1089 g蛋白质,据此提出的改进意见是根据对样品中蛋白质含量的预判调整沉淀剂的用量,以节约试剂,缩短消化时间。设置沉淀剂浓度、消化滤液量和滴定盐酸浓度为单因素正交试验,结果表明,三氯乙酸浓度对测定结果影响最大。实验最佳条件为用15%三氯乙酸沉淀,取14 g滤液进行消化,用0.0101 mol/L盐酸滴定。3.改进方法对市售乳粉中三聚氰胺检测的应用与验证用改进三氯乙酸沉淀法测得的非蛋白氮含量对照异常数据预警线,可对可疑样品进行初筛,用高效液相色谱法(HPLC)进一步验证是否含有三聚氰胺等高含氮物质。