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背景与目的:研究表明,PI3K/Akt信号传导通路的异常激活与细胞恶性转化密切相关。本实验研究PI3K激酶抑制剂Wortmannin联合丝裂霉素对肝癌HepG-2细胞增殖、凋亡及相关基因Cyclin D1、Bad表达的影响,并初步探讨其机制。方法:①不同药物浓度的渥曼青霉素、丝裂霉素单独及联合作用HepG-2细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖、生长状态。②分别加入终浓度为200 nmol/L渥曼青霉素、30 nmol/L丝裂霉素单独及联合用药作用HepG-2细胞24h,Hoechst 33258荧光染色观察凋亡细胞核形态学变化。③分别加入终浓度为200 nmol/L渥曼青霉素、30 nmol/L丝裂霉素单独及联合用药作用HepG-2细胞24h,流式细胞术检测肿瘤细胞增殖周期和凋亡率。④分别加入终浓度为200 nmol/L渥曼青霉素、30 nmol/L丝裂霉素单独及联合用药作用HepG-2细胞24h,逆转录聚合酶联反应及Western blot检测PI3K/Akt信号传导通路相关基因和蛋白的表达。结果:①渥曼青霉素、丝裂霉素均可抑制肝癌细胞增殖,并呈量效与时效关系。24 h单用渥曼青霉素、丝裂霉素的IC50分别是联合用药IC50的8.57倍及1.85倍。②渥曼青霉素、丝裂霉素单独及联合用药作用HepG-2细胞24h,流式细胞术检测结果显示,细胞分别主要被阻止于G0/G1期、G2/M期、G0/G1期。细胞凋亡率由处理前的(3.23±1.32)%分别提高到(9.17±1.78)%,(9.00±2.01)%,(14.82±1.36)% (P<0.01)。③渥曼青霉素、丝裂霉素单独作用HepG-2细胞24h,荧光显微镜下观察, HepG-2细胞出现典型的凋亡形态学改变。联合用药后,细胞凋亡形态改变更加明显。④渥曼青霉素、丝裂霉素单独作用HepG-2细胞24h,细胞p-Akt活化程度降低,Cyclin D1表达量减少,Bad表达量增加(P<0.05)。联合用药后, p-Akt、Cyclin D1、Bad mRNA及蛋白表达水平改变更加明显(P<0.05)。结论:①渥曼青霉素、丝裂霉素均可抑制肝癌HepG-2细胞生长、增殖,联合用药后,抑制作用更加明显。②渥曼青霉素与丝裂霉素均可诱导肝癌HepG-2细胞凋亡,联合用药后,促凋亡作用更加明显。③Cyclin D1 mRNA及蛋白表达水平下调是渥曼青霉素与丝裂霉素抑制HepG-2细胞生长、增殖作用机制之一; Bad mRNA及蛋白表达水平上调是渥曼青霉素与丝裂霉素诱导HepG-2细胞凋亡作用机制之一。④渥曼青霉素与丝裂霉素可能是通过PI3K/Akt信号通路抑制HepG-2细胞增殖,诱导其凋亡。