化学发光分析法因其灵敏度高、操作方便、设备简单、易于实现自动化等优点,越来越受到科研工作者的广泛关注。本文对Luminol-H₂O₂-辣根过氧化物酶（HRP）-荧光素（F）化学发光共振能量转移体系的反应机理进行了研究,基于该体系建立了适体生物传感器,实现了对凝血酶的高灵敏度检测。本文所建立的方法具有高灵敏度、高选择性,在体外诊断、临床研究、药物筛选的研究等方面具有广泛的应用前景。本文主要开展了以下几个方面的工作:一、Luminol-H₂O₂-HRP-荧光素化学发光共振能量转移体系的研究研究了荧光素对Luminol-H₂O₂-HRP化学发光反应体系的增强作用。采用luminol还原四氯金酸的方法制备得到lumAuNPs复合粒子。分别讨论了Luminol-H₂O₂-HRP-荧光素化学发光共振能量转移体系在游离状态和绑定状态下的荧光光谱性质,并对其反应机理进行了研究。实验结果表明,在该化学发光共振能量转移体系中,在H₂O₂的氧化和辣根过氧化物酶（HRP）的催化作用下,luminol作为能量供体,将化学反应释放的能量转移给能量受体荧光素。其反应机理为:荧光素自由基（F·^-）促进luminol自由基（L·^-）的形成,其与H₂O₂反应后形成luminol内过氧化物(LO₂^2-),此时化学能量从LO₂^2-转移到F·^-,形成荧光素内过氧化物(FO₂^2-)。FO₂^2-释放出氧气的同时在510 nm处发光。二、基于化学发光共振能量转移体系检测凝血酶的研究建立了一种基于适体生物传感器检测凝血酶的方法。将鲁米诺和荧光素（或HRP）标记的凝血酶双适体与纳米金-磁珠复合物结合,以降低检测背景值,利用适体与凝血酶的特异性结合作用将其从纳米金-磁珠复合物表面解离下来,采用Luminol-H₂O₂-HRP-荧光素化学发光共振能量转移体系,建立了适体生物传感器,实现了对凝血酶的高灵敏度检测,检测限达1.0×10^-9 mol/L,且具有良好的选择性。