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黄粉虫幼虫体内蛋白、脂肪含量较高,其体内蛋白质含量高达50%(干重)左右,素有“动物蛋白饲料之王”的称誉。由于黄粉虫易于饲养,我国黄粉虫资源非常丰富。长期以来,由于对其缺乏系统研究,开发利用较少,使优质蛋白资源被浪费。目前,利用黄粉虫幼虫体内丰富的蛋白质制备活性肽的研究尚未见报道。本文对脱脂黄粉虫幼虫蛋白Alcalase酶解制备降血压肽进行了系统研究,成功制备出黄粉虫幼虫蛋白降压肽。这一研究为拓宽黄粉虫幼虫的应用范围,开发黄粉虫幼虫蛋白资源开辟了新途径。采用超临界CO2对黄粉虫幼虫粉进行脱脂,脱脂条件:萃取压力35MPa,萃取温度35℃,萃取时间200min,常压分离。脱脂后总蛋白含量达到60.5%。脱脂黄粉虫幼虫中清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白及谷蛋白含量分别占蛋白总量的9.0%、1.5%、2.3%及23.7%,其中清蛋白及谷蛋白含量较高;另有63.5%的蛋白质残留在残渣中。氨基酸组成分析结果表明,谷蛋白及残渣蛋白中非极性氨基酸和芳香族氨基酸含量较高,这两种蛋白对于黄粉虫幼虫蛋白酶解制备降血压肽贡献较大,为提高蛋白利用率,故在后续试验中直接以脱脂黄粉虫幼虫粉作为酶解原料。采用蛋白酶对脱脂黄粉虫幼虫蛋白进行水解制备降血压肽。从6种蛋白酶中筛选出Alcalase水解脱脂黄粉虫幼虫蛋白,酶解条件:底物浓度3%,加酶量4000U/g底物,酶解温度50℃,pH8.5,水解度20%时,水解产物对ACE的抑制作用较强,此时酶解液的IC50值为0.39mg/mL。采用350W/g底物的脉冲超声波对脱脂黄粉虫幼虫蛋白进行预处理,当预处理时间10min时,蛋白酶解至DH20%所用时间缩短20%。通过紫外吸收光谱、荧光发射光谱、蛋白疏水性、游离巯基含量、粒径、圆二色谱及变性聚丙烯酰胺凝胶电泳测定,可知超声波能够引起清蛋白及谷蛋白空间结构改变,但并未改变蛋白质的一级结构。在脱脂黄粉虫幼虫蛋白水解过程中施加超声波处理(2.5及5min)可以加快水解速率。实验结果表明:短时间超声波处理(5min内)可使Alcalase活性增强,长时间超声波处理会降低其活性;且超声波处理后,Alcalase的紫外吸收光谱及荧光发射光谱发生了改变,说明其结构发生了变化。但超声波处理不能改变水解液(DH8%)的氨基酸组成。采用活性炭对脱脂黄粉虫幼虫蛋白酶解液进行脱色。脱色后的蛋白酶解液经葡聚糖凝胶G-15分离后得到四个组分(Peak1、Peak2、Peak3及Peak4)。通过对四个组分进行氨基酸组成分析及相对分子质量分布测定,可知Peak2组分更适合用来制备ACE抑制肽。采用高效液相色谱法测定四个组分对ACE的抑制活性,结果表明四个组分的IC50值分别为0.46、0.23、0.83及2.81mg/mL。采用液相色谱对Peak2进行分离纯化,得到20个组分,其中P2-F6及P2-F9两个组分对ACE的抑制作用较强。对这两个组分进行二次液相色谱分离纯化,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对其中的活性多肽进行结构鉴定。结果表明,从P2-F6中分离得到二肽Ser-Met和三肽Tyr-Ala-Asn,从P2-F9中分离得到二肽Asn-Tyr,其IC50值分别为0.026、0.017及0.011mg/mL,其中Ser-Met和Tyr-Ala-Asn是尚未见报道的降血压肽。将Peak2组分分别以100、200和400mg/kg体重的剂量对原发性高血压大鼠(SHR)进行一次灌胃,SHR血压下降明显。同时发现脱脂黄粉虫幼虫蛋白酶解物具有一定的抗氧化作用。