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本研究分为三部分:
第一部分:建立吲哚美辛诱导胚泡着床障碍小鼠模型并观察补肾安胎方及其补肾、益气活血组分对模型小鼠胚泡着床疗效观察
目的:观察补肾安胎方及其补肾、益气活血组分对吲哚美辛诱导着床障碍小鼠胚泡着床疗效并探讨其作用机制。
方法:将孕鼠随机分为正常组、模型组、补肾安胎组、补肾组和益气活血组。妊娠第3和4 天,分别于上午8:00~9:00,下午4:00~5:00 间正常组小鼠两次皮下注射麻油0.12ml,其余四组皮下注射吲哚美辛油剂0.12ml,造成小鼠胚泡着床障碍的动物模型。分别收集妊娠第5、6、8 天小鼠子宫,计数着床位点个数并比较其大小形态。
结果:与正常组比较,模型组的着床位点数显著降低;与模型组比较,补肾安胎组小鼠着床位点数显著提高,虽补肾组、益气活血组着床位点数有所增加,但无统计学意义;补肾组、益气活血组小鼠着床位点数较补肾安胎组少,但也没有统计学意义。
形态学肉眼观,在第5、6 天,模型组胚泡分布明显不均,且比正常组小;与模型组比较,补肾安胎组胚泡左右两侧子宫分布均匀,且胚泡大小与正常组相当,而补肾组、益气活血组胚泡分布尚均匀,较正常组及补肾安胎组稍小。在妊娠第8 天,模型组胚泡大小形状不一,各胚泡之间发生融合;而补肾安胎组、正常组胚泡大小均等,形状规则,胚泡间界限清楚,无相互融合现象;补肾组、益气活血组胚泡大小较均匀,但有融合现象发生。
结论:单独使用补肾或益气活血的方法在胚泡着床障碍方面有一定的治疗作用,但不能明显提高小鼠着床位点数,而将补肾和益气活血集为一体的补肾安胎方则可以明显提高小鼠着床位点数,改善胚泡的形态和宫内的分布。
第二部分:补肾安胎方及其补肾、益气活血组分调节胚泡着床障碍小鼠雌、孕激素及其受体的实验研究
目的:比较补肾安胎方及其补肾、益气活血组分对着床障碍小鼠雌、孕激素及其受体的影响。
方法:分组和造模方法同第一部分。妊娠小鼠第5、6 天留取血清和子宫标本,采用放射免疫法检测血清中雌、孕激素含量;采用免疫组织化学技术检测小鼠子宫雌、孕激素受体表达。
结果:补肾安胎方可以提高血清中第5、6 天P 水平以及第6 天E2 水平,并且促进着床局部ER、PR的表达。而补肾方、益气活血方虽有轻度促进ER、PR 作用,但是改善程度弱于补肾安胎方。
结论:将补肾法和益气活血法结合起来的补肾安胎方可以通过对E2、P、ER、PR的影响,更大程度上改善着床障碍小鼠子宫内膜容受性,促进胚泡着床。
第三部分:补肾安胎方及其补肾、益气活血组分对胚泡着床障碍小鼠VEGF 影响的实验研究
目的:比较补肾安胎方及其补肾、益气活血组分对胚泡着床障碍小鼠VEGF的影响。
方法:分组和造模方法同第一部分。在小鼠妊娠第5、6 天(Pd5、6),各组均取妊娠子宫。采用免疫组织化学法测定VEGF 蛋白的表达,采用RT-PCR的方法检测VEGFmRNA的含量。
结果:与正常组比较,模型组小鼠子宫内膜中VEGF 蛋白和mRNA 显著降低;与模型组比较,补肾安胎组小鼠子宫内膜中VEGF 蛋白和mRNA均显著提高;而补肾组和益气活血组VEGF 蛋白和mRNA(除第六天补肾组外)虽稍有增高,但差别无统计学意义。虽然补肾安胎组、补肾组、益气活血组三组VEGF 蛋白和mRNA的比较并不是完全统一,但是从总体上,补肾组、益气活血组小鼠子宫内膜中VEGF 蛋白和mRNA 还是较补肾安胎组弱。
结论:补肾安胎方可以提高着床障碍小鼠子宫内膜VEGF 蛋白和mRNA的含量,有助于促进胚泡着床,而补肾方和益气活血方单独使用不能显著提高模型小鼠子宫内膜VEGF 蛋白和mRNA 含量。