生物催化法合成硝基不饱和脂肪酸及其衍生物

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硝基不饱和脂肪酸是不饱和脂肪酸经过硝化作用,产生的具有一定亲水性和生理活性的硝基化产物。硝基不饱和脂肪酸(如硝基油酸、硝基亚油酸)已经被证实存在于健康人的血液、尿液、细胞膜及机体组织中。硝基油酸和硝基亚油酸在健康人体中的浓度超过11μM,其在体内天然存在,且无毒副作用,具有广泛的生物学活性。如果能够在体外通过一定的方法快速高效的合成,将具有十分广阔的临床开发利用前景。本文主要以油酸和油酸甲酯为研究对象,通过生物催化法合成硝基油酸及硝基油酸甲酯,并与化学合成法进行对比。首先从实验室保藏菌种中筛选了一株产过氧化物酶的米曲霉FFCC3102s,通过液态发酵从发酵液中提取出过氧化物酶。发酵液中的过氧化物酶酶活力在1.17 U/mL,通过硫酸铵分级沉淀和透析过滤的初步纯化,酶活力提高到4.50 U/mg。分别考察了pH和温度等条件过氧化物酶的稳定性的影响,结果显示在pH=7和45℃条件下,该酶的稳定性较好。然后通过化学和生物催化法合成硝基油酸及硝基油酸甲酯。化学法合成硝基油酸产物收率为58.9%,目标产物和副产物的比例是1:4:生物催化法合成,目标产物和副产物比例是1:1。化学方法合成硝基油酸甲酯,产物收率为42%,目标产物和副产物比例为1:2(目标产物收率为14.3%,副产物收率为26.9%。);生物催化法合成硝基油酸甲酯,产物收率为3.5%,产物很纯,几乎没有副产物。合成产物经过分离纯化后,通过红外光谱,核磁共振,液质联用及气质联用技术进行表征,证实合成的产物是硝基不饱和脂肪酸,其中生物催化法合成的硝基油酸甲酯产物纯度为98%。本实验证明了过氧化物酶在硝基不饱和脂肪酸的生成过程中起到了关键性的作用,它能够抑制副产物的产生,其中在硝基油酸甲酯的生成过程中的作用效果比硝基油酸更显著。
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