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目的:运用彩色多普勒超声检测兔肾缺血再灌注损伤后肾动脉血流动力学变化,分析其与肾小管上皮Bcl-2表达的相关性,探讨彩色多普勒超声评价肾缺血再灌注损伤程度的价值。
方法:建立兔肾缺血再灌注模型,56只体重1.8—2.4kg的日本大白兔随机分为三组:正常对照组(control组)8只,缺血再灌注组(I／R组)24只,假手术组(S组)24只。缺血再灌注组在麻醉后,开腹,切除右肾,夹闭左肾动脉1h后恢复血供,根据再灌注时间点不同分为2h、8h、24h亚组.假手术组仅麻醉、开腹、分离肾动脉,不阻断血流；根据根据保留左肾时间分为2h、8h、24h三个亚组。各组动物按预定时间点探测肾动脉的血流动力学变化(Vmax、Vd、Tamax、PI、RI),取肾组织后处死兔子。用石蜡包埋切片,HE染色分析肾组织病理损伤程度,采用免疫组化(SABC)法检测肾小管中Bcl-2蛋白的表达水平。运用Image Plus Pro6.0图像分析软件进行分析,计算阳性表达细胞的平均光密度值。
结果:1.缺血再灌注后肾动脉血流动力学变化:与正常对照组、假手术各亚组分别比较,再灌注2h亚组肾主动脉、段动脉、叶间动脉的Vmax、Vd、Tamax、PI、RI变化均无明显差异(P>0.05)；与正常对照组、假手术各亚组分别比较,再灌注8h亚组肾主动脉Vmax、Vd、Tamax、PI、RI变化均无明显差异(P>0.05),段动脉、叶间动脉均出现RI增大(P<0.05)；与正常对照组、假手术各亚组分别比较,再灌注24h亚组肾主动脉、段动脉、叶间动脉均出现Vmax升高、PI及RI增大(P<0.05),而Vd及Tamax变化无明显差异(P>0.05)。2.肾组织的病理变化:假手术组肾小管均未见明显病变。缺血再灌注后2h、8h、24h时肾小管出现不同程度的上皮细胞肿胀、管腔扩张,部分细胞内可见空泡形成,24时肾小管损伤最重,可见大量坏死脱落细胞,间质炎性细胞浸润。3.肾组织Bcl-2的表达:假手术组肾小管上皮Bcl-2呈弱阳性表达,随着保留左肾的时间延长,分为2h、8h、24h三个时间点,平均光密度值分别为0.2487±0.0232、0.2516±0.0347、0.2613±0.0414,各时间点之间Bcl-2表达的平均光密度值无明显差异；缺血再灌注后Bcl-2的表达上升,主要表达于外髓及远曲小管,明显较近曲小管强,随着缺血再灌注时间延长表达范围增加。缺血再灌注组分为2h、8h、24h三个时间点,Bcl-2表达平均光密度值分别为0.2757±0.0321、0.2833±0.0214、0.3312±0.0523均高于假手术组的各对应组,并随着缺血再灌注时间延长而逐渐上升,再灌注24h时达高峰,说明Bcl-2蛋白随着缺血再灌注损伤的加重表达增加。4.肾主动脉、段动脉、叶间动脉的Vmax、PI、RI与Bcl—2的表达有直线正相关性,其中以各级动脉的RI值和叶间动脉的指标相关性最高。
结论:在兔肾缺血再灌注实验中,彩色多普勒超声能实时定量监测兔缺血再灌注损伤后24小时内的肾动脉血流动力学变化；缺血再灌注后Bcl-2的表达上升,主要表达于外髓及远曲小管,明显较近曲小管强,随着缺血再灌注时间延长表达范围增加,再灌注24h时达高峰；肾动脉血流动力学变化与肾小管Bcl-2的表达存在明显的线性正相关性；彩色多普勒超声有望成为评价兔肾缺血再灌注损伤程度及判断预后的实用技术。