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桃(Prunus. Persica( L). Bastch)起源于我国西部地区,经过长期的自然选择和人工驯化栽培,已形成众多的变种,品种和类型。对桃种质的鉴定,分类和演化研究,以往主要从形态学、孢粉学、同工酶等方面开展工作[2,3,4,5],均取得了一定的研究成果。但还存在许多分歧,在技术手段上也存在一定的局限性。RAPD技术在品种鉴定、遗传多样性分析检测、系谱分析等方面已得到广泛的应用[6,7,8,9,10],证实了其应用的价值和有效性。本研究通过RAPD标记技术揭示了桃种质基因组部分品种类型间DNA的丰富多态性,旨在从分子水平探讨桃种质的分类及演化地位,尝试RAPD技术在桃品种鉴定上的可行性与方法,为科研生产提供了一定的理论和实践依据。主要研究结果如下:(1)利用RAPD技术对供试的桃品种类型的遗传变异进行了研究,用筛选出的13个引物,共47个多态性位点(见表4),对48个桃种质进行WARD系统聚类发现,以聚类距离130.0进行分类,可将全部品种类型分为五类。其中甘肃桃,山桃,部分古老的以北方蜜桃、硬肉桃为代表的北方品种,以美国油桃为代表的油桃品种,以及以南方水蜜桃为代表的品种各自聚为一类。传统的古老品种以生态型进行一级分类,以果实性状进行二级分类;而对近现代育成的品种直接以果实性状为标准加以分类。不考虑现代育成的品种,大体上普通桃种质可分为以下类型:华中生态型品种群(包括日本桃在内),华北生态型品种群,新疆生态型品种群,美国生态型品种群(欧洲生态型品种群的分支);每个生态品种群以下可以按果实性状分为硬肉桃,蜜桃(或水蜜桃),蟠桃,油桃,黄肉桃等类型。 (2)对48个桃品种类型进行RAPD分析,根据相似系数进行WARD法聚类,结果显示,传统的古老品种具明显的地域特色,而现代品种间遗传背景相近,地域差异不显著。美国油桃单独聚为一类,可能存在一条古老的进化途径。新疆桃与北方古老品种亲缘关系相近,可能共同起源于硬肉桃。就RAPD分析研究结果而言,山桃和甘肃桃独立划为一级,处于较原始的地位,而南方桃(华中生态型)、北方桃(华北生态型,包括新疆桃在内)以及美国油桃处于一种近乎平行的进化地位,可能直接起源于甘肃桃、山桃。不考虑光核桃的进化地位,桃的演化途径可能如下:以甘肃桃、山桃为起源中心,分别向西、向东、向南分别演化成新疆桃品种群、华北桃品种群、华中桃品种群。(3)用筛选出的6个多态性引物(OPQ14,OPW17,OPT16,OPU14,OPG17,OPI07),共15个稳定多态性位点,对48个材料进行鉴定,除白凤和雨花露外,所有品种类型均得到有效分离鉴定。(4)分析了蛋白质和RNA对DNA检测结果的影响,鉴于DNA粗提的操作实际,仅以DNA电泳结果为依据,确定样品DNA浓度范围。优化的PCR扩增程序可分为五段:预变性(STEP1),预扩增(STEP2- STEP5),主扩增(STEP6- STEP9),后扩增(STEP10- STEP13),完全扩增(STEP14- STEP16)。根据各阶段不同的扩增目地,各项参数略有差异。