槐糖脂发酵工艺的放大及抗菌和抗肿瘤作用的研究

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槐糖脂(Sophorolipids,SLs)是一种由非致病性酵母发酵产生的一种胞外糖脂类次级代谢产物。本文首先对槐糖脂的发酵生产工艺进行了放大研究,以求提高槐糖脂总产量;然后研究了槐糖脂及槐糖脂与纳米羟基磷灰石搭载体两种药物对Hela细胞药学活性对比研究;最后研究了槐糖脂对致病菌的药物学活性作用。为槐糖脂在今后大规模应用提供了参考依据。本文主要的研究内容和结果如下:1.槐糖脂发酵工艺的放大。在已优化培养基的基础上将拟威克酵母的发酵体系进行放大,研究其对槐糖脂总产量的影响。本文采用了放大发酵体系至5 L,50L发酵罐的实验方法,结果表明将发酵体积从摇瓶放大至发酵罐后,对各种槐糖脂产量的提高有帮助,总槐糖脂产量由最初的42 g/L增加到发酵罐的84.5 g/L。发酵时间也大幅缩短,由原本所需的196 h减少至96 h。然后将发酵体系进一步放大至50 L,此时对槐糖脂产量并没有显著的影响,且二者所需发酵时间也基本持平,总槐糖脂产量从83.8 g/L提高至84.5 g/L。分析得到改进的原因就是通过发酵罐工艺的放大,改变了发酵液中氧气的含量,刺激了酵母菌的生长代谢。2.SLs与纳米羟基磷灰石nHA-SLs对宫颈癌细胞药学活性对比研究。本文通过槐糖脂对宫颈癌细胞体外实验,实验证明了内酯型双乙酰槐糖脂对人宫颈癌Hela细胞有良好的抑制作用,经过槐糖脂的作用后,细胞的存活率大大降低,细胞形态发生了明显的变化,细胞膜凸出,体积减小,细胞肿胀裂解成碎片、细胞解体。通过纳米羟基磷灰石的搭载,槐糖脂的药物缓释时间得到了延长,由游离态药物的30 min,延长至14 h,nHA-SLs可以持续向肿瘤细胞供给药物分子,为治疗提供长时间不间断的药物供给,同时也避免了槐糖脂药物的浪费。本文对槐糖脂体外抑制宫颈癌Hela细胞活性进行了相应研究,为槐糖脂作为新一代抗肿瘤药物的开发打下了基础。3.槐糖脂对致病菌的药物学活性研究。在大多数真菌病原体中菌丝是他们的营养体,本文对不同浓度槐糖脂药物与井冈霉素进行了对比研究,二者对马铃薯晚疫病菌丝的均有明显的抑制作用。随着培养基中药物浓度的增高,孢子萌发数也越来越少,当PDA培养基中槐糖脂浓度达到10 mg/m L时,其抑菌率可以达到98.96%,当井冈霉素浓度达到100μg/mL时,68.40%的马铃薯孢子无法成活。当PDA培养基中槐糖脂浓度达到10 mg/m L时,其对菌丝生长的抑制率达到了91.29%,而当培养基中井冈霉素浓度达到100μg/mL时,其抑制率也进一步增加至89.92%。研究表明,槐糖脂对农作物病原菌良好的抑制作用,并且具有对呼吸道无刺激,对皮肤无伤害,对环境无污染等优良特性。
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