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剑线虫是一类重要的植物外寄生线虫,在植物根部取食同时,因其瘤针粗大,严重破坏根组织,影响根系长势。除取食危害以外,剑线虫属线虫还可传播重要的植物病毒,对农林业生产造成重要影响。目前,剑线虫属中的美洲剑线虫和标准剑线虫在我国都有发生报道。因剑线虫种间形态相似,需要经验丰富的鉴定专家才能鉴别。本文就以美洲剑线虫和标准剑线虫为供试样本寻求一种简单、准确、高效分子生物学鉴别剑线虫的方法,即分离微卫星标记物。通过研究,在供试的美洲剑线虫群体(Xiphinema americanum group)上应用简并寡核苷酸引物聚合酶链式反应(DOP-PCR)技术。此技术可以克服基因组DNA样本不足的难题,能够在微量基因组DNA条件下成功分离和标记了微卫星重复子。本研究中,目标DNA片段被克隆前,其DOP-PCR产物首先被连接到pGEM(?)-T载体上,然后通过寡核苷酸(CA)9和载体上游引物配成一对引物,对包含微卫星位点的左侧DNA片段进行PCR扩增,该过程后的产物用于克隆和DNA序列分析；依据已分析的部分左侧序列,设计引物并与载体下游引物一起,对DOP-PCR产物再进行PCR扩增,使包含整个微卫星及其右侧连接部分被扩增,重复克隆和DNA序列分析并结合已分析的左侧序列,获得了包含全部微卫星重复子的DNA片段的完整序列。这种分离含微卫星标记位点DNA片段的路径新颖、高效,有效克隆率极大提高。研究中,发现和分析了9个包含微卫星重复子的片段,美洲剑线虫(X. americanum sensu stricto)和美洲剑线虫亚群组(X. americanum subgroup)的标记性引物被设计和检测。利用简并寡核苷酸引物聚合酶链式反应PCR (DOP-PCR)对标准剑线虫体的总DNA进行全基因组扩增,对扩增产物进行筛选,发现7个含(CA)n的微卫星片段,经过试验证明,可以在种的水平上诊断标准剑线虫。