论文部分内容阅读
目的研究IL-23在正常大鼠脊髓和损伤后不同时间段脊髓组织中的表达格局,并鉴定其细胞表达定位。方法1.使用纽约大学脊髓损伤仪以10gX25mm的标准制备中等程度的SD大鼠脊髓损伤模型。2.用Trizol提取总RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测脊髓损伤前后各组大鼠脊髓组织中IL-23mRNA的表达。3.单去污裂解液提取组织蛋白,通过Westenrblot检测脊髓损伤前后各组脊髓组织中IL-23蛋白的表达。4.取各组脊髓标本进行冰冻切片,通过免疫荧光检测脊髓损伤前后各组大鼠脊髓组织中IL-23的表达。5.使用IL-23/CD3,IL-23/CD68和IL-23/GFAP双标记免疫荧光染色法检测IL-23在脊髓损伤前后各组脊髓组织中不同类型神经细胞和免疫细胞上的表达和定位。结果1.成功建立中等程度撞击伤的SD大鼠脊髓损伤模型。2.RT-PCR结果显示,正常对照组IL-23mRNA的表达为0.34±0.02,大鼠脊髓损伤后第1、3、7、14和21天,IL-23mRNA的表达分别为0.65±0.02、0.67±0.02、0.71±0.04、0.84±0.10禾口0.95±0.05。脊髓损伤各组中IL-23mRNA的表达均明显高于正常对照组,具有显著性差异(7k0.05),并随着损伤后时间的延长,表达逐渐增多,3周达到高峰。3.Westenr blot结果显小,正常对照组IL-23蛋白表达为0.65±0.05,脊髓损伤后第1、3、7、14和21天,IL-23蛋白表达分别为0.76±0.05、0.81±0.03、0.89±0.04、0.94±0.06和0.99±0.05。脊髓损伤各组中IL-23蛋白的表达均高于正常对照组,具有显著性差异(穴0.05),并随着损伤后时间的延长,表达逐渐增多,3周达到高峰。4.免疫荧光结果显示正常SD大鼠脊髓未发现IL-23的表达,脊髓损伤后第1、3、7、14和21天,IL-23~+细胞分别为11±3、45±5、49±4、75±5和22±3个/mm2。脊髓损伤后第1、3、7、14和21天,IL-23~+细胞率分别为5.33±1.22%、12.91±1.20%、19.31±0.99%、19.34±0.90%禾口6.14±0.59%。脊髓损伤后各组IL-23~+细胞数和IL-23~+细胞率较正常对照组均明显增多,具有显著性差异(户<0.05),从损伤后一天至两周表达逐渐增加,两周后开始下降。5.免疫荧光双染色结果显示,正常SD大鼠脊髓检测未发现CD3~+细胞,在脊髓损伤后第1天在损伤局部开始检测到CD3~+细胞,第3天达到第一次高峰,第7天有所下降,第14天达到第二次高峰。脊髓损伤后第1、3、7、14和21天,CD3~+细胞比例分别为16.75±0.84%、25.19±0.83%、7.11±0.26%、32.56±0.95%、9.63±0.95%。更重要的是,这些CD3~+细胞绝大部分表达IL-23,脊髓损伤后第1、3、7、14和21天,IL-23~+CD3~+/CD3~+比例分别为78.13±4.63%、78.44±2.41%、73.62±12.01%、75.38±5.86%、78.99±15.91%。6.正常SD大鼠脊髓和脊髓损伤后第1、3、7、14和21天,CD68~+细胞比例分别为2.38±0.35%,10.45±0.72%、12.24±0.88%、11.61±0.52%、8.13±0.31%、5.36±0.81%; CD68~+细胞在损伤后第一天开始增多,第三天达到高峰后缓慢下降。这些脊髓损伤后第1、3、7、14和21天,IL-23~+CD68~+/CD68~+比例分别为83.58±7.48%,86.22±3.28%,99.17±4.19%,70.99±2.70%和58.7±19.61%7.正常对照组大鼠脊髓未检测到IL-23在GFAP+细胞的表达,而脊髓损伤后第1、3、7、14和21天IL-23~+GFAP+/GFAP+百分比分别为52.82±15.40%、87.97±8.65%、72.92±8.79%、80.19±5.72%和88.95±4.86%,与正常对照组比较均明显增加,具有显著性差异见(穴0.05)。结论1.脊髓损伤各组脊髓组织中IL-23mRNA和IL-23蛋白含量较正常对照组均明显增加,从损伤后一天至三周表达逐渐增多。2.组织免疫荧光染色发现脊髓损伤各组脊髓组织中IL-23~+细胞和IL-23~+细胞率较正常对照组均明显增加,从损伤后第一天至两周表达逐渐增加,两周后开始下降。3.免疫荧光双染色法进一步证实IL-23主要由CD3阳性的淋巴细胞、CD68阳性的小胶质细胞和单核巨噬细胞以及GFAP阳性的星形胶质细胞产生。