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目的:研究necroptosis死亡的关键激酶RIP1K(receptor interaction protein 1kinase,RIP1K)在缺血性脑中风诱导的星形胶质细胞增生及胶质瘢痕形成中的作用,并研究其作用机制是否与调节星形胶质细胞的VEGFD-VEGFR3信号通路有关。方法:采用大鼠短暂性大脑中动脉阻塞(transient middle cerebral artery occlusion,t MCAO)方法,建立大鼠星形胶质细胞增生及胶质瘢痕模型。模型前5天侧脑室注射慢病毒沉默RIP1K基因,以脑萎缩体积、行为学症状等指标评价大鼠脑中风后期的神经功能恢复情况。采用原代培养的新生大鼠皮层星形胶质细胞氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)再灌注的方法,建立体外星形胶质细胞增生及胶质瘢痕形成的细胞模型。星形胶质细胞与神经元co-culture法检测RIP1K基因沉默对神经元轴突的影响。LDH方法检测OGD再灌注诱导的星形胶质细胞乳酸脱氢酶漏出率。免疫荧光法、western blot法检测体内体外缺糖缺氧再灌注对星形胶质细胞增生及胶质瘢痕形成的标志蛋白GFAP、neurocan以及phosphacan表达情况。Western blot法及免疫荧光法观察星形胶质细胞RIP1K、VEGFD、VEGFR3表达情况。结果:术前5天给予RIP1K基因沉默病毒可有效减少t MCAO诱导的大鼠胶质瘢痕的形成,减少脑中风28天后脑萎缩体积(P<0.01),及改善行为学症状(P<0.01)。Western blot结果显示:t MCAO后皮层缺血区胶质瘢痕标志蛋白GFAP、neurocan、phosphacan以及RIP1K表达上调(P<0.01)。在RIP1K基因沉默后,免疫组化显示sh RIP1K可抑制皮层缺血区胶质瘢痕标志蛋白GFAP、neurocan、表达上调以及VEGFD、VEGFR3表达的上调(P<0.01)。在星形胶质细胞氧糖剥夺再灌注的体外星形胶质细胞增生及胶质瘢痕模型,Western Blot结果显示:星形胶质细胞在OGD再灌注后,胶质瘢痕的标志蛋白GFAP、neurocan、phosphacan以及RIP1K、VEGFD、VEGFR3表达上调(P<0.01),Elisa结果显示:在星形胶质细胞OGD/再灌注后,星形胶质细胞以及培养基中VEGFD表达较正常组均增加。RIP1K基因沉默可对抗OGD/再灌注引起的星形胶质细胞GFAP、neurocan、phosphacan、RIP1K表达变化,并减少VEGFD、VEGFR3表达的上调(P<0.01)。在星形胶质细胞OGD/再灌注胶质瘢痕模型与神经元共培养系统中,LDH结果显示:RIP1K基因沉默可以抑制OGD/再灌注诱导的细胞乳酸脱氢酶漏出率(P<0.01),促进神经元轴突的延伸(P<0.01)。结论:1.抑制RIP1K可以促进缺血性脑中风后期神经功能的恢复,其作用可能与RIP1K基因沉默抑制星形胶质细胞增生及胶质瘢痕的形成有关。2.RIP1基因沉默抑制胶质瘢痕的形成的机制可能与抑制VEGFD-VEGFR3信号通路有关。