【摘 要】
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胸腺基质淋巴细胞生成素(Thymic stromal lymphopoietin,TSLP)的表达分布广泛,主要包括肺、皮肤和肠道屏障表面的上皮细胞等。呼吸道被过敏原或病原微生物刺激后,TSLP的表达
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胸腺基质淋巴细胞生成素(Thymic stromal lymphopoietin,TSLP)的表达分布广泛,主要包括肺、皮肤和肠道屏障表面的上皮细胞等。呼吸道被过敏原或病原微生物刺激后,TSLP的表达会上调。TSLP可以促进DC细胞(树突状细胞)成熟。成熟的DC细胞会诱导过敏性哮喘。基因组学研究发现,TSLP是过敏性炎症的相关位点。在小鼠过敏原诱导哮喘模型和灵长类过敏原诱导的哮喘模型中,已经证实胸腺基质淋巴细胞生成素在诱导过敏性哮喘中扮演了关键角色。本实验构建了 TSLP及WM35-Fab(TSLP抗体)两种瞬转和稳转质粒,在瞬转确认了 TSLP及WM35-Fab在293E中可顺利表达后,我们构建TSLP及WM35-Fab稳转的CHO细胞株。为了便于纯化,我们在TSLP及WM35-Fab蛋白C端连接组氨酸标签。TSLP及WM35-Fab his标签蛋白通过Ni柱亲和层析和分子排阻色谱层析拿到了高纯度蛋白。TSLP及WM35-Fab蛋白由于是稳转细胞株表达,均一性较高。我们尝试不同孵育比例后,发现WM35-Fab:TSLP摩尔比在1:3时,W35-Fab/TSLP蛋白复合物孵育效果最好。我们使用实验室44个商业化晶体试剂盒对W35-Fab/TSLP蛋白复合物进行结晶条件筛选,获得了三个衍射质量较好的晶体,并通过X射线衍射实验收集到了数据。综上,本实验获得了 W35-Fab/TSLP蛋白复合物的结晶条件,并收集到了分辨率较好的晶体结构数据,为后续其结构生物学研究奠定了基础。
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