目的研究SiRNA沉默TGF-βRⅡ对体外培养人瘢痕成纤维细胞增殖的影响及诱导的成纤维细胞凋亡,为临床增生性瘢痕的防治提供科学的实验依据。方法用DNA重组技术将针对人TGF-βⅡ型受体基因不同部位所设计的3对shRNA序列克隆到真核表达质粒pSilencer^TM3.1-H1neo vector中,构建TGF-βⅡ型受体shRNA表达载体pSilencer^TM3.1-H1-TGF-βRⅡshRNA1、2、3。脂质体介导转染人原代成纤维细胞,经G418筛选抑制TGF-βⅡ型受体表达的稳定细胞克隆。实验采用MTT检测SiRNA沉默TGF-βRⅡ对体外培养人瘢痕成纤维细胞增殖的影响,通过Giemsa染色、流式细胞仪及基因组DNA电泳检测SiRNA沉默TGF-βRⅡ诱导的成纤维细胞凋亡。结果3个TGF-βⅡ型受体shRNA表达载体pSilencer^TM3.1-H1-TGF-βRⅡshRNA1、2、3经限制性酶切及序列分析证明基因插入正确。RT-PCR、Western blotting均证实:3种shRNA重组质粒中pSilencer^TM3.1-H1-TGF-βRⅡshRNA2可明显降低细胞内TGF-βⅡ型受体mRNA丰度及TGF-βⅡ型受体蛋白表达。选择采用pSilencer^TM3.1-H1-TGF-βRⅡshRNA2作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞24h、48h、72h后,可抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,并出现成纤维细胞突出变短、变少,胞核、胞质浓缩,染色质边集,呈现典型的凋亡细胞形态;流式细胞仪检测瘢痕成纤维细胞凋亡率为18.4%,与对照组比较,差异有显著性:1.5%琼脂糖电泳结果出现DNA梯子,以作用48小时最为明显。结论成功构建了TGF-βⅡ型受体shRNA表达载体pSilencer^TM3.1-H1-TGF-βRⅡshRNA1、2、3,并筛选出特异而高效地阻断TGF-βⅡ型受体表达的克隆。在增生性瘢痕成纤维细胞生长融合后早期,SiRNA沉默TGF-βRⅡ表达对其增殖具有明显抑制作用。在瘢痕成纤维细胞生长融合后早期,SiRNA沉默TGF-βRⅡ表达可诱导体外培养的瘢痕成纤维细胞凋亡。