论文部分内容阅读
口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一种烈性接触性传染病,具有传播速度快、传播范围广的特点,给畜牧业造成了巨大的经济损失。目前主要是通过疫苗接种和扑杀来控制口蹄疫的传播。传统口蹄疫灭活苗可以有效的防止该病的发生,然而却存在一些安全问题。因此,研制安全、高效的基因工程疫苗迫在眉睫,腺病毒活载体疫苗因其自身的优越性和应用的广泛性,已被应用于口蹄疫基因工程疫苗的研究。本实验采用腺病毒表达系统,构建了含有O型口蹄疫病毒多基因的重组腺病毒质粒pAd-P1,2A3C,然后在表达人5型腺病毒E1基因的293细胞内反向包装,获得了能够表达O型口蹄疫病毒多基因的复制缺陷型重组腺病毒Adv-P1,2A3C.通过CELL BIOLABS公司的快速腺病毒滴度检测试剂盒对复制缺陷型重组腺病毒进行滴度测定,结果为5.3×1010VP/mL,然后用复制缺陷型重组腺病毒Adv-P1,2A3C,对BALB/c小鼠肌肉注射免疫(0.1mL／只),同时设置阴性野生型腺病毒对照组和阳性0型口蹄疫病毒抗原对照组；每隔两周进行一次免疫,免疫三次。每次免疫结束后第13天,通过液相阻断ELISA的方法检测0型口蹄疫病毒的抗体效价；最后取小鼠脾脏通过ELISPOT的方法检测细胞因子IL-4和IFN-γ的变化。抗体效价的检测结果为：第一次免疫之后重组毒免疫组与O型口蹄疫病毒抗原对照组效价都较低,第二次免疫之后重组毒免疫组的抗体效价可以达到1：27比。型口蹄疫病毒抗原对照组稍高,第三次免疫之后重组毒免疫组抗体效价达到了1：210,而O型口蹄疫病毒抗原对照组为1：28；细胞因子检测结果为：复制缺陷型重组腺病毒Adv-P1,2A3C免疫组的ELISPOT斑点数多于阳性抗原对照组,统计学分析,存在显著差异(P<0.01)。综上,本实验获得的表达O型口蹄疫病毒多基因的复制缺陷型重组腺病毒活载体疫苗(Adv-P1,2A3C)不仅可以激发小鼠的体液免疫反应,同时还可以很好的激发小鼠的细胞免疫反应,最终更全面、更高效的激发小鼠免疫反应。