【摘 要】
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着丝粒(centromere)是真核细胞染色体上一个高度特化的区域,位于染色体的主缢痕,对有丝分裂和减数分裂过程中染色体的行为起着关键作用;着丝粒是动粒(kinetochore)组装的核心
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着丝粒(centromere)是真核细胞染色体上一个高度特化的区域,位于染色体的主缢痕,对有丝分裂和减数分裂过程中染色体的行为起着关键作用;着丝粒是动粒(kinetochore)组装的核心,而动粒又是纺缍体微管(microtubules,MTs)的组织中心.由于着丝粒的典型结构和功能相当复杂,又被称为着丝粒-动粒复合体(centromere-kinetochore complex,CKC).对于细胞周期调控来说,着丝粒在纺锤体检验点中发挥着重要的作用.因此,着丝粒是染色体结构和功能的交汇中心,阐明着丝粒的组成及其结构对于我们理解其功能具有重要意义.该研究运用间接免疫荧光、免疫印迹、抗原亲和的特异抗体洗脱(AAPA)等方法利用来自一例自身免疫病(系统性进行性硬皮病)人的抗血清(编号为F46)进行了免疫化学分析,并针对所检测的特异抗原在不同物种中的表达进行了初步的研究.结果如下:1)在HeLa细胞中,间接免疫荧光显示,有一种F46抗原定位于染色体的着丝粒上;免疫印迹表明F46识别一种分子量为65kD的主要成分;AAPA表明免疫印迹中所识别的65kD抗原就是间接免疫荧光分析中发现的定位于着丝粒的F46抗原.由于所检测到的F46抗原的分子量和抗原性不同于目前已经命名的着丝粒蛋白,因而可能是一种新的着丝粒蛋白成分,暂命名为F46ag(F46 antigen).2)将HeLa细胞同步化于细胞周期的不同时相进行F46ag的间接免疫荧光,结果显示G1期细胞中呈现很多单个的着丝粒荧光斑点,G2期细胞中有很多成对的着丝粒荧光斑点,M期细胞中清晰可见染色体主缢痕两侧的荧光信号.可见F46ag是一种常驻性着丝粒蛋白,在整个细胞周期中都有表达,且主要定位于着丝粒区域.3)F46ag在进化上较为保守,除存在于人细胞株(HeLa)中外,还存在于单环刺螠体腔球细胞、果蝇(Drosophila virilis)细胞、小鼠细胞株L1210、印度麂(IM)细胞中.但不同物种中F46ag分子量稍有不同:在HeLa细胞中约为65kD,在IM细胞中约为67kD,在L1210细胞中约为63kD.在单环刺缢体腔球中F46ag聚集于一点或两点,显示细胞可能处于静止期,染色质已经高度致密.果蝇唾腺染色体中,由于所有染色体的着丝粒聚于一点(染色中心),F46血清间接免疫荧光显示出F46ag信号为一个明亮荧光斑点.IM细胞中F46ag荧光斑点的个数比染色体条数一,说明其中一条染色体上不含其同源蛋白;每条染色体上荧光斑点的强弱也不同,表明每条染色体上F46ag含量不同.以上结果说明:F46抗血清检测到的分子量为65kD左右的抗原成分F46ag是一种新的常驻性着丝粒蛋白.且进化上较为保守,存在于单环刺螠、果蝇、小鼠、印度麂、人中,功能上可能较为重要.
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