番茄细菌性斑点病是一种严重影响番茄质量和产量的世界性细菌病害,由丁香假单胞杆菌番茄致病变种Pseudomonas syringae pv.tomato(PST)引起。番茄中的抗病基因Pto与病原菌的无毒基因AvrPto互作是研究植物与病原物互作的典型模式系统,使植物抗病机理研究得到迅速的发展。但是感病番茄与病原物相互作用的机理研究的相对较少。冰核组实验室通过酵母双杂交系统发现毒性蛋白AvrPto/AvrPtoB在感病番茄中可能对核酮糖1,5-二磷酸加氧梭化酶小亚基(rbcS)起作用,并发现感细菌性斑点病的番茄“中蔬四号”中存在与Pto完全一致的序列Lescpth5。为明确rbcS是否是AvrPto/AvrPtoB在感病番茄中的毒性靶点,及Pto基因家族成员Lescpth5的与Pst的互作关系。本文:(1)提取中蔬四号RNA,合成第一链cDNA,提取Pst18的基因组DNA,根据已报道的rbcS、AvrPto和AvrPtoB的序列序列设计引物,扩增出其编码基因,分别将其克隆到酵母双杂交系统的诱饵载体和猎物载体上,利用酵母双杂交系统验证rbcS与AvrPto/AvrPtoB的互作关系。(2)提取中蔬四号RNA,合成第一链cDNA,根据已报道的Lescpth5序列设计引物,扩增出其编码基因,将其克隆到酵母双杂交系统的诱饵载体上;构建Pst18 cDNA文库,利用酵母双杂交系统筛选Lescpth5与Pst18互作基因。初步筛选结果显示结果显示:(1)pGBKT7-AvrPto与pGADT7-rbcS和pGBKT7-AvrPtoB与pGADT7-rbcS能够互作,但是互换载体后,共转化显示不互作。可能是由于某个蛋白不太适合应用于双杂交系统,也有可能是假阳性。(2)pGBKT7-Lescpth5基因对Pst18 cDNA文库筛选,得到阳性克隆在NCBI上进行Blast比对,其与pstDC3000酰基辅酶A脱氢酶家族蛋白同源性为97%,长度为215bp。酰基辅酶A脱氢酶家族蛋白与细菌能量代谢相关,在三羧酸循环起催化脱氢重要作用。推测Lescpth5基因虽然不能起到类似pto的抗病作用,但是可能对pstDC3000酰基辅酶A脱氢酶家族蛋白产生微弱的影响,通过影响细菌的脂多糖代谢阻止细菌在寄主体内大量繁殖。