骨折敷贴法及其接骨膏对家兔骨折愈合过程中BMP-7表达的影响

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目的:总结并归纳整理骨折后使用中医敷贴外治方法的理论,评价敷贴方法在促进骨折愈合过程中的作用及其疗效。在此基础上,建立家兔骨折模型,通过影像学观察外敷接骨膏后对家兔骨折愈合过程中骨折断端边缘变化情况及骨痂阴影形成情况;行组织学和免疫组化检测以观察骨折愈合和BMP-7在家兔骨折愈合过程中的表达,从分子水平探讨土家族药接骨膏促进家兔骨折愈合的作用机理。方法:(1)理论研究:通过查阅大量古今文献,对骨折敷贴法及其发病源流、病因病机、辨证论治等进行系统归纳和整理,探讨并阐述骨折敷贴方法的理论价值和应用价值。(2)实验研究:选取48只成年健康日本大耳白兔,制作左侧桡骨3mm骨缺损模型,随机分为接骨膏实验组(简称实验组)和模型对照组(简称对照组),每组24只。于造模术后1d待切口干燥后实验组给予土家族药接骨膏外敷,按小夹板固定治疗骨折原理包扎固定;对照组不敷药,仅以同样大小的小夹板包扎固定。分别于造模术后的第2W、4W、6W末用空气栓塞法处死实验动物,每组每次8只,于每次处死前行DR摄片,然后取骨标本行石蜡包埋后组织切片,并行HE常规染色和免疫组化检测,以从分子水平探讨BMP-7在骨折愈合过程中的表达及变化情况。(3)所有数据均采用SPSS12.0软件包进行统计学处理,用x±s表示,均采用两个样本均数比较的t检验。结果:(1)敷贴法理论探讨:敷贴法是中医外治法的重要组成部分;应用历史悠久,使用方法便捷,疗效显著,经济安全,是闭合性骨折外治的常用方法。(2)DR摄片:第2W末两组均可见到较为清晰的骨折线,实验组有骨痂形成,对照组仅有骨膜反应,实验组骨痂阴影密度相比对照组较高;第4W末实验组骨折线接近消失,有外骨痂桥接骨折断端,面积逐渐缩小,髓腔未完全再通;对照组可见骨痂形成,髓腔未通;且实验组骨痂阴影密度、骨痂生长面积均优于对照组;第6W末实验组骨痂生长速度较快,骨折断端骨性连接,骨折线完全消失,髓腔完全再通;对照组仍可见到模糊的骨折线,但有明显骨痂形成并桥接骨折断端,面积缩小,髓腔未通。第2W、4W、6W实验组骨痂生成质量、阴影密度均高,骨痂质量评分均明显优于对照组,有极显著差异(P<0.01)。(3)HE染色:在光镜下观察,实验组与对照组比较,第2W末实验组骨折区域有大量纤维组织连接,较对照组早,并可见有钙盐团沉积,有些区域偶可见少量骨小梁和软骨成分形成;第4W末实验组骨折区域内纤维骨痂形成及OB数量、骨痂量较对照组多,有板层骨形成,软骨成分较少,骨髓腔基本再通;第6W末实验组骨折断端骨痂量明显多于对照组,有大量板层骨连接,骨髓腔再通,骨性愈合时间较对照组早;对照组可见骨小梁形成,软骨成分较少。(4)免疫组化检测:实验组各时相点所测得BMP-7MOD值与对照组各时相点所测BMP-7MOD值行两样本均数比较的t检验,均有极显著性差异(P<0.01);且实验组各时相点BMP-7的表达量均明显高于对照组,表达时间明显延长。结论:敷贴法应用历史悠久,使用方法便捷,疗效显著,是闭合性骨折外治的常用方法。土家族药接骨膏外敷治疗骨折,能显著改善骨折局部血液循环,促进血肿吸收及钙盐沉积。能通过增强并延长各时相点BMP-7在骨折局部的表达量而促进骨折局部骨痂形成,加速骨痂生长速度及骨性愈合,提高骨痂质量,从而促进骨折愈合,缩短骨折愈合时间。为进一步阐明接骨膏促进骨折愈合的作用机理及明确敷贴法在闭合性骨折中的应用及其地位奠定了一定的理论基础。
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