蓝莓为小浆果,在东北地区的生长时间在每年的3、4月份,在7、8月份大量产果,采收后在室温下一周左右即快速腐烂。为了解决蓝莓集中时间采收与市场的长期需求之间的问题,采后的蓝莓经常被放置于冷库中保存以延缓腐烂。但冷藏后的蓝莓果实转入常温货架期,果蒂部位极易出现凹陷现象,并且随着贮藏时间的延长果蒂凹陷症状加重,影响蓝莓果实的品质。这个问题已经成为蓝莓产业发展的瓶颈问题。因此,研究冷藏蓝莓果蒂凹陷机制,探索其调控技术对于蓝莓产业的发展具有重要作用和意义。本研究利用iTRAQ技术对采后0d和6d以及冷藏30d后货架期第0d和6d的蓝莓果实进行蛋白质组学分析,筛选差异蛋白并进行相关的生物信息学分析。用Western blot和real-time PCR两种手段对其中12个差异表达显著的蛋白在蛋白水平以及转录组水平上进行验证。在上述研究的基础上,以能量代谢为基础分析了不同冷藏时间后常温贮藏期的蓝莓果实能量物质的变化。重点研究了糖酵解途径、三羧酸循环以及氧化磷酸化途径中关键酶的基因表达水平,从能量代谢角度揭示了冷藏蓝莓凹陷的作用机制。最后,通过外源ATP和DNP处理蓝莓果实,并观察其在冷藏过程中作用效果,探究两种外源能量物质处理对于冷藏蓝莓果蒂凹陷的机制。结果如下:利用iTRAQ鉴定出的2041种蛋白质中1411种蛋白被定量,而后采用GO分析和KEGG分析对鉴定的蛋白质进行功能分析和归类。其中与蓝莓果蒂凹陷相关差异表达蛋白质163个,82个蛋白表达量上调,81个蛋白表达量下调,其中包括“氨基酸的合成与分解”、“活性氧代谢”、“膜脂代谢”和“能量代谢”几个方面的多个具体代谢通路,说明了导致蓝莓果实果蒂凹陷是由多个方面和多个因素共同导致的结果。与冷藏过程中的变化有关差异蛋白质322个,154个蛋白表达量上调,168个蛋白表达量下调,其中“钙离子信号通路”、“光合作用”及“光合作用固碳作用”均表现出异常的变化,可以看出冷藏在一定程度影响了能量代谢的前期合成及离子运输过程;与发生在冷藏30天常温货架期过程中发生变化相关蛋白共228个,122个蛋白表达量上调,106个蛋白表达量下调,其中“维生素B6代谢”和“核糖体”变化较大,维生素B6代谢途径的上调与氧化活性的上调有关有关,显示了活性氧代谢的活跃性。为了验证以上结果,以Ratio>±1.2且FDR<0.05为标准筛选出12个差异显著的蛋白进行Western blot验证,而后在上述基础上又选取了8个与蓝莓果实凹陷相关的蛋白进行real-time PCR验证,这些基因表达量与蛋白组相对结果完全一致。常温货架期的蓝莓果实,凹陷率和腐烂率显著上升,并且伴随着AMP含量显著上升,以及ATP含量、EC值和氧化磷酸化途径复合酶I-IV的显著下降,这说明了蓝莓果实内部能量代谢的下降以及预示能量物质的亏缺最终导致了蓝莓果蒂部位凹陷的发生。糖酵解途径中葡糖激酶(glucokinase,GK)基因表达量和丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)显著下调,在一定程度上影响了乙酰辅酶A的生成以及三羧酸循环的正常进行;三羧酸循环中柠檬酸合酶(citrate synthase,CS)和异柠檬酸脱氢酶(isocitrate dehydrogenase,ICD)表现出显著的下降趋势,降低了NADH以及电子的供给,影响氧化磷酸化的进程;氧化磷酸化代谢途径中的NADH脱氢酶基因、SDH基因、CCR基因、CCO基因和ATP合成酶(ATP synthase,ATPase)基因的表达量均显著下调,说明蓝莓果实细胞中能量物质合成出现问题,最终会导致细胞能量的亏缺。外源ATP以及DNP作为对照组分别对冷藏蓝莓进行处理,其中ATP处理显著降低了蓝莓果实的凹陷率和腐烂率,DNP处理则加速了凹陷和腐烂的发生。ATP处理的蓝莓果实在冷藏后的常温货架期间能够保持较高的ATP含量和EC值,DNP处理的蓝莓果实则呈现出显著的下降趋势,这说明ATP处理能够维持细胞较高的能量水平,使其抵抗外界物质的侵害,维持细胞正常的生理代谢作用。在糖酵解途径、三羧酸循环和氧化磷酸途径中经过外源ATP处理的蓝莓果实基因表达量相对水平表现相对平稳,而DNP处理的蓝莓果实在糖酵解途径中表现相对稳定但显著低于ATP处理组。在三羧酸循环途径以及氧化磷酸化途径中的关键酶基因的相对表达量中出现显著高于ATP处理组的情况,这说明经过DNP处理的蓝莓果实在冷藏后的货架期间丧失了响应应激作用的功能,这将大大消耗蓝莓果实中营养物质,加速果实的衰亡。