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小黑豆是药食兼用的保健食材,蛋白质营养价值高,氨基酸含量丰富,必需氨基酸平衡良好。山西省小黑豆资源丰富,品种独特,所以小黑豆抗氧化活性肽的开发具有广阔的应用前景和原料基础。 目前我国关于大豆多肽的研究日趋深入,而小黑豆肽的研究却进展缓慢。影响小黑豆肽研究的主要问题有:蛋白酶的筛选,水解过程中生成苦味肽,分离纯化技术不成熟,功能特性的研究不深入等等。 本文以小黑豆分离蛋白为研究对象,利用蛋白酶复合酶解技术制备低分子量的小黑豆肽,精制纯化后对其抗氧化特性进行系统研究。 通过不同蛋白酶组合方式的酶解试验,确定采用碱性蛋白酶和霉菌蛋白酶两步水解的方法制备低分子量的小黑豆肽。通过单因素试验研究了pH、温度、底物浓度、加酶量、反应时间等参数对蛋白酶复合酶解效果的影响,并确定了碱性蛋白酶和霉菌蛋白酶分步水解的最适条件;复合酶解得到的小黑豆多肽经凝胶层析法测定其分子量分布,分子量<3100的多肽含量达到54.90%以上。 小黑豆多肽溶液经氨肽酶脱苦、活性炭脱色和离子交换树脂脱盐等方法精制后,在压力0.25MPa下依次通过截留分子量(MWCO)10000、6000和2000Da的超滤膜,得到分子量为>10000Da、10000-60000Da、6000-20000Da、<2000Da的不同小黑豆多肽组分;体外清除DPPH·自由基的方法研究发现,分子量小于2000 Da小黑豆肽(SBP3)组分对DPPH·自由基具有最强清除作用,说明具有抗氧化作用的小黑豆活性肽平均分子量主要集中2000 Da以下。 利用低分子量的小黑豆肽(SBP3)组分饲喂D-半乳糖诱导的衰老小鼠,进行体内抗氧化实验。结果表明小黑豆肽SBP3组分能使小鼠胸腺指数和脾脏指数升高,血清MDA含量明显下降,GSH-Px活力显著提高;肝脏中MDA和LF含量明显下降,GSH-Px活力显著提高。其中高剂量组(800mg/kg bw·d)小鼠的抗氧化效果和VC阳性组相近,与衰老模型组相比差异极显著(P<0.01),说明低分子量的小黑豆肽具有很强的抗氧化作用,是一种良好的天然抗氧化活性肽。