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子宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一。在全球范围内,每年约有20多万女性死于宫颈癌。在发展中国家,宫颈癌则属于常见多发的妇科肿瘤,但其病因尚未完全明确。目前治疗宫颈癌大多采用化学合成药物,在治疗过程中易产生毒副作用和耐药性。蛋白类药物以其毒副作用低和不产生耐药性等优点已引起研究者的高度关注。利用生物技术研发蛋白类药物已成为癌症治疗领域中的研究热点。人乳铁蛋白(human lactoferrin,hLF)是一种隶属于铁结合蛋白家族的糖基化蛋白。它具有多种生理功能,如抑菌;抗病毒感染作用;调节体内铁的平衡;促进铁的传递和吸收;调节机体免疫功能;增强机体抗病能力等作用。近期的研究表明乳铁蛋白还具有抑制人体多种肿瘤细胞的生长、预防及治疗肿瘤的作用,而对重组人乳铁蛋白(recombinant human lactoferrin, rhLF)抗宫颈癌作用的研究国内外还未见相关报道。本研究分别利用离子交换以及金属螯合法提取转基因羊乳汁中的重组人乳铁蛋白,经过透析、冻干后作用于体外培养的Hela细胞,并对rhLF抗宫颈癌活性及其作用机理进行了研究,获得如下结果。(1)含有重组人乳铁蛋白的羊乳汁分别用离子交换层析柱和镍螯合的亲和柱进行蛋白分离,洗脱液透析后冻干得到蛋白。经SDS-PAGE电泳检测确定其为重组人乳铁蛋白,得率分别为30%和65%。(2)Hela细胞培养基中加入100mg/mlrhLF,培养48h后用MTT法检测检测,结果显示rhLF能显著抑制Hela细胞的生长,抑制率达到73.25%。(3)HE染色、Hoechst染色和TUNEL染色均显示rhLF有诱导Hela细胞凋亡的作用。(4)细胞周期分析显示,100mg/ml rhLF处理的Hela细胞处于G2/M期细胞数增加,并且出现明显的凋亡峰,表明rhLF可能是通过影响细胞周期来诱导细胞凋亡的。(5)通过免疫组化检测突变型p53基因及PCNA在rhLF处理Hela细胞中的表达,表明rhLF能够抑制两种基因蛋白的表达。