【摘 要】
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深度伤口愈合是一个活跃的代谢过程,需要不断增加氧气、免疫信号和生长因子,新的血管再生和增强的血管生成对这些营养物质的运输至关重要。血管内皮细胞不仅可以分泌血管生成因子和抗凋亡因子,还能重组血管内皮屏障和维持血管通透性。内皮祖细胞是血管内皮细胞生成和血管壁发育中不可缺少的部分。血管重建不足将导致慢性不愈合伤口,而外源性细胞治疗具有促进大面积创伤组织修复作用。胚胎干细胞是一种具有自我更新能力的全能性细
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深度伤口愈合是一个活跃的代谢过程,需要不断增加氧气、免疫信号和生长因子,新的血管再生和增强的血管生成对这些营养物质的运输至关重要。血管内皮细胞不仅可以分泌血管生成因子和抗凋亡因子,还能重组血管内皮屏障和维持血管通透性。内皮祖细胞是血管内皮细胞生成和血管壁发育中不可缺少的部分。血管重建不足将导致慢性不愈合伤口,而外源性细胞治疗具有促进大面积创伤组织修复作用。胚胎干细胞是一种具有自我更新能力的全能性细胞,因其可分化为组织特异性细胞而被应用于多种伤口模型研究,然而,以干细胞为基础的皮肤再生疗法缺乏足够数量的特化细胞。本研究采用两步诱导法,先筛选出增殖能力强的内皮祖细胞,进一步分化为血管内皮细胞,并采用造模注射治疗以验证细胞的功能性,主要结论如下:1)通过10ng/mL VEGF和5ng/mL b FGF,小鼠胚胎干细胞（品系RW.4）衍生为CD34+和CD133+内皮祖细胞,最佳诱导时间为3d;2)在50 ng/mL VEGF和25ng/mL b FGF的条件下,将内皮祖细胞诱导7d后分化为“铺路石”样明显的血管内皮样细胞,该细胞不仅高表达血管内皮细胞的标志基因CD31、CD144、LAMA5、v WF、Tek、KDR和特异蛋白CD31、CD144、LAMA5,而且具有较好的成管、迁移和Weibel-Palade小体形成能力;3)将PBS、诱导获得的内皮祖细胞和二次诱导的血管内皮细胞分别应用于大小相同的创面治疗,结果显示,相比PBS,内皮祖细胞能增加伤口愈合率,血管内皮细胞具有较好的促进胶原合成、毛囊再生、炎症反应和血管生成的作用,且血管内皮细胞通过分泌或刺激旁分泌VEGF以加速伤口愈合。研究结果证实分步诱导法有助于在体外建立稳定、高效的将小鼠胚胎干细胞转化为血管内皮细胞的体系;小鼠胚胎干细胞衍生内皮祖细胞分化成的血管内皮细胞具有较高的存活率和较强的组织修复功效。
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