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第一部分小鼠GSTK1基因启动子荧光素酶报告基因质粒的构建及功能鉴定目的：构建小鼠谷胱甘肽S转移酶K1(mouse Glutathione S-transferase kappa, mGSTK1)启动子荧光素酶报告基因质粒，并分析其活性。方法：根据GeneBank中mGSTK1基因序列设计引物，应用PCR技术扩增mGSTK1基因启动子片段（翻译起始点ATG上游-2081～-35区域），插入pGL3-Basic载体，获得mGSTK1启动子报告基因质粒pGL3-mGSTK1-promoter-2046。再以pGL3-mGSTK1-promoter-2046为模板，进一步获得了3个5’端部分缺失的报告基因质粒：pGL3-mGSTK1-promoter-936、pGL3-mGSTK1-promoter-228和pGL3-mGSTK1-promoter-76。利用脂质体将不同长度的mGSTK1启动子驱动的荧光素酶报告基因质粒瞬时转染3T3-L1和HEK293细胞，48小时后检测荧光素酶的活性。结果：所构建的质粒经酶切和测序鉴定正确。pGL3-mGSTK1-promoter-2046、 pGL3-mGSTK1-promoter-936和pGL3-mGSTK1-promoter-228在二种细胞株均显示出较强的转录活性，而pGL3-mGSTK1-promoter-76转录活性显著降低。结论：成功构建mGSTK1基因启动子荧光素酶报告基因质粒；翻译起始点上游的-263～-111区域是mGSTK1基因启动子的重要区域。第二部分罗格列酮对3T3-L1脂肪细胞和小鼠脂肪组织GSTK1转录水平的影响目的：观察罗格列酮对3T3-L1脂肪细胞以及小鼠脂肪组织中GSTK1转录水平的影响，并分析过氧化物酶增殖体激活受体γ （PPARγ）对报告基因质粒pGL3-mGSTK1-promoter-2046荧光素酶活性的影响。方法：1.3T3-L1细胞诱导分化成熟后，10μM罗格列酮作用24小时后收集细胞，采用实时荧光定量PCR法检测GSTK1和C/EBPα基因mRNA水平的变化。以DMSO处理24小时为对照组。2.取正常小鼠脂肪组织，10μM罗格列酮作用24小时后收集组织，采用实时荧光定量PCR法检测GSTK1和C/EBPα基因mRNA水平的变化。以DMSO处理24小时为对照组。3.将pGL3-mGSTK1-promoter-2046与含PPARγ及其配体RXR表达质粒共转染HEK293细胞，48小时后检测报告基因质粒荧光素酶的活性变化。结果：1.在诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞中，与对照组相比，罗格列酮组GSTK1mRNA表达水平有上升的趋势（p＞0.05），C/EBPαmRNA表达水平明显增高（p﹤0.05）。2.在小鼠脂肪组织中，与对照组相比，罗格列酮组GSTK1和C/EBPαmRNA水平均明显上调（p﹤0.05）。3. PPARγ对pGL3-mGSTK1-promoter-2046的荧光素酶活性没有显著影响。结论：1.罗格列酮上调诱导分化成熟后的3T3-L1脂肪细胞以及小鼠脂肪组织中的GSTK1和C/EBPα基因的mRNA水平。2. GSTK1基因翻译起始位点上游-2081到-35区域可能不存在PPARγ的结合位点；GSTK1mRNA水平的升高可能与C/EBPα增加有关。