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传统抗生素的频繁使用导致抗生素耐药菌株迅速增加,人类健康受到威胁。两栖类活性肽因为具有抗菌,抗肿瘤,免疫调节且不易产生耐药性等特点使其成为相关研究的热点。两栖类皮肤分泌物中富含多种生物活性肽,其中抗菌肽因为其特殊的作用靶点,不易使细菌和肿瘤细胞产生耐药性,而成为最有前途的新型抗生素和抗肿瘤药物。
中国林蛙(Rana chensinensis)是中国东北特有的蛙种,像其它两栖类动物一样,中国林蛙在长期适应潮湿及复杂的生活环境中,其皮肤成为天然免疫系统的重要器官。在应对各种微生物的过程中,中国林蛙皮肤可以分泌大量生物活性多肽,这些活性肽种类丰富,结构较为稳定,对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有抑制效果。本研究以中国林蛙为材料采用电刺激法获得中国林蛙皮肤分泌物,用制备型反相高效液相色谱对其进行纯化,得到F18,F24,F28,F30,F31,F34,F36,F37,F40,F43,F46,F49,F50,F55,F57,F58,F60,F62,F66,F70共20个组分;对这20各组分分别进行初步活性筛选,得到F40,F43,F46,F49,F50,F57,F60,F62,F66,共9个具有活性组分,进一步用分析型反相高效液相色谱纯化,得到F46,F49,F57,F60四个样品。利用MALDI-TOF/TOF MS和Q-TOF/TOF MS对这四个组分进行一级结构测定,得到生物活性肽的分子量范围是566-3699Da,最短的肽含有5个氨基酸,最长的由37个氨基酸组成。在此基础上我们利用生物信息学软件对所得到的多肽进行分析。经同源性比对发现,这些多肽中有3条属于缓激肽家族,有1条是血管紧张素样肽,还有许多其他新的多肽。其中21条肽链具有稳定结构,有8条肽链主要以α-螺旋结构为主,其他多肽链主要是无规卷曲结构。这些多肽的发现为丰富新药的发现和研制提供了可能。