骨髓造血微环境基质细胞与急性白血病发病关系的研究

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目的 1.建立人骨髓基质细胞(bone marrow stromal cell,BMSC)体外分离、培养的方法。 2.分别设立对照组(非血液及免疫系统疾病患者)和初发急性白血病组,观察BMSC数量、形态、生长速度及融合能力的差异,并探讨这些差异在急性白血病发病过程中的可能作用。 3.计数法绘制BMSC生长曲线,比较对照组及初发急性白血病组BMSC生长趋势,分析其在造血支持能力方面的差异及其与急性白血病发病的可能关系。 4.设立对照组、初发急性白血病组及急性白血病治疗后完全缓解组,分别检测BMSC表面与造血调控密切相关的粘附分子CD54(ICAM-1)和CD106(VCAM-1)的表达情况,探讨BMSC粘附分子表达变化与急性白血病发病的关系。 5.观察对照组和初发急性白血病组BMSC在体外对人白血病细胞株(K562)生长的影响,初步探讨其作用机制。 方法 1.分别采集各组患者骨髓约5ml,用Ficoll分离液(密度1.077g/ml)经密度梯度离心法分离单个核细胞,以2×106/ml的密度接种于含10%胎牛血清(FCS)的LG-DMEM培养液中,放置于37℃、25%CO2、饱和湿度孵育箱孵育,每周半量换液。 2.倒置显微镜下观察对照组及初发急性白血病患者BMSC从接种到贴壁约80-90%过程中细胞形态的变化、贴壁速度及融合能力,并适时拍照。 3.取传代培养的对照组及急性白血病组BMSC,按2×106/ml密度接种于24孔板中,每天取3孔,将细胞消化计数取均值,连测8天,绘制BMSC生长曲线。 4.用0.05%的胰蛋白酶和0.01%的EDTA消化收获细胞,加入PBS离心洗涤两
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