论文部分内容阅读
肝细胞癌是中国第一和世界第三大肿瘤相关死亡的病因。尽管外科手术和肝移植为肝癌提供了有效的治疗措施，但肝癌根治性切除术后的5年复发率仍高达54.1-61.5%，其中62.4-77.8%发生在术后两年以内，这些导致了肝癌患者的预后仍然很差。S100蛋白家族是一个具有EF螺旋结构、钙结合蛋白家族，至少有22个家族成员。S100蛋白广泛分布于人体细胞的胞浆和胞核内，参与细胞周期活动、细胞分化等众多活动。17个S100家族成员基因定位均位于稳定性差、易在肿瘤发生中出现染色体重排的1号染色体长臂2区1带（1q21）。既往的研究已经证实了一些S100家族成员在肝癌组织中有差异表达，包括S100A2，S100A4，S100A7和S100A10。因此，很有必要系统地分析和验证S100其它家族成员在肝癌和正常肝组织中的表达情况。本研究收集自2010年3月至2013年3月期间在吉林大学第二附属医院经外科手术切除并经病理证实为肝细胞癌的组织及与其对应的癌旁组织各62例和正常肝组织22例。统计患者的临床相关信息，主要内容包括：性别、年龄、原发肿瘤的大小、血清中乙型肝炎病毒的感染、血清中甲胎蛋白的水平、是否有门脉癌栓、分化程度、肿瘤转移情况及临床病理分期等。我们应用免疫组化和Real-Time PCR的方法对比分析原发性肝细胞癌组织、与其对应的癌旁组织和正常肝组织中S100A3的表达情况，探讨S100A3与原发性肝细胞癌的关系及其临床意义。体外研究斑蝥酸钠对HepG2和Huh7两种肝癌细胞系中S100A3的表达差异及其对肝癌细胞凋亡的影响。最后，研究RNA干扰对HepG2细胞内的S100A3蛋白和基因水平的影响及对HepG2细胞在小鼠体内成瘤能力和致死能力的影响。研究结果表明，与癌旁组织及正常肝组织相比，S100A3蛋白水平和mRNA在肝细胞癌组织中的表达水平更高。在分化程度不同的肝细胞癌细胞中，S100A3蛋白表达阳性率也不相同，分化越低，阳性率越高。斑蝥酸钠可以明显促进HepG2和Huh7肝癌细胞的凋亡。细胞凋亡与HepG2和Huh7细胞中S100A3的基因水平和蛋白水平明显负相关：斑蝥酸钠处理后明显降低了HepG2和Huh7细胞中S100A3的表达，从而促进了细胞的凋亡。转染S100A3siRNA的HepG2细胞中S100A3蛋白的表达明显降低和基因水平均明显下降。我们用NSG免疫缺陷小鼠体内成瘤实验观察了S100A3对HepG2在小鼠体内成瘤能力的影响。结果表明，给予S100A3基因干扰的HepG2细胞内的S100A3蛋白水平明显降低，在小鼠体内能够明显抑制肿瘤的生长并提高小鼠的生存率。综上所述，我们通过实验发现肝癌组织中S100A3的高表达现象，S100A3的阳性表达率与肝细胞癌的细胞分化程度有关，分化越低，表达阳性率越高。体外实验研究证明了斑蝥酸钠对HepG2和Huh7肝癌细胞系内S100A3的表达具有抑制作用，从而诱导肝癌细胞的凋亡。siRNA可以明显降低HepG2细胞内的S100A3蛋白和基因表达水平，并且降低其在小鼠体内的成瘤能力。该研究将为肝癌的药物治疗和基因治疗提供新的思路与方法。