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目的： 探讨谷胱甘肽S-转移酶pi（GSTpi）磷酸化对乳腺癌阿霉素耐药性的影响，并探讨GSTpi新型抑制剂NBDHEX是否通过抑制GSTpi磷酸化逆转乳腺癌阿霉素耐药。 方法： 1、用CCK-8法检测乳腺癌细胞株MCF-7和MCF-7/ADR对阿霉素的敏感性。采用Western Blot和免疫荧光技术检测GSTpi在这两种细胞株的表达以及细胞内定位。 2、用GSTpi质粒转染MCF-7，shRNA质粒转染MCF-7/ADR，用Crispr/Cas构建和筛选GSTpi敲降的MCF-7/ADR细胞株。采用Western Blot和免疫荧光技术检测GSTpi的表达。用CCK-8法检测GSTpi表达变化对乳腺癌细胞阿霉素耐药性的影响。 3、酶活实验检测NBDHEX对GSTpi活性的影响。CCK-8法检测NBDHEX对细胞的毒性作用以及对阿霉素敏感性的影响。流式细胞术检测凋亡率及Western Blot检测凋亡相关蛋白进一步验证NBDHEX对阿霉素耐药性的影响。 4、采用质谱技术检测MCF-7/ADR中GSTpi的磷酸化位点。酶活实验检测各位点磷酸化对GSTpi活性的影响。CCK-8法检测GSTpi磷酸化对乳腺癌细胞阿霉素耐药性的影响。Western Blot评估NBDHEX对GSTpi磷酸化水平的影响。5、应用Western Blot和免疫荧光技术检测GSTpi磷酸化对其核易位的影响。 结果： 1、Western Blot及免疫荧光结果显示GSTpi在敏感株MCF-7中无表达，而在耐药株MCF-7/ADR中表达并且富集于细胞核。 2、与对照组相比，MCF-7过表达GSTpi后细胞IC50升高。与对照组相比，GSTpi-shRNA下调MCF-7/ADR GSTpi表达后，IC50降低。筛选出三株GSTpi敲降的MCF-7/ADR，与对照组相比，它们的IC50也降低。 3、酶活实验结果表明NBDHEX可以抑制GSTpi活性。CCK-8结果显示NBDHEX单药对细胞生长无抑制作用，但其可增加细胞对阿霉素的敏感性。流式细胞术和Western Blot结果表明NBDHEX联合阿霉素可以促进MCF-7/ADR细胞凋亡。 4、质谱分析结果表明MCF-7/ADR中GSTpi蛋白存在多个位点的酪氨酸磷酸化。酶活实验及CCK-8结果表明GSTpi第7位点的酪氨酸磷酸化增强GSTpi活性，并且可以介导乳腺癌细胞对阿霉素的耐药性。Western Blot结果提示NBDHEX可以抑制GSTpi酪氨酸磷酸化的水平。 5、Western Blot、免疫荧光结果表明GSTpi磷酸化可以促进GSTpi核易位。 结论： 1、GSTpi的表达水平与乳腺癌细胞对阿霉素的耐药性呈正相关。 2、GSTpi第7位点的酪氨酸磷酸化增加其自身活性，介导耐药。此外，GSTpi磷酸化还可促进GSTpi核易位。 3、NBDHEX可通过抑制GSTpi磷酸化抑制其活性，从而逆转乳腺癌细胞对阿霉素的耐药性。