【摘 要】
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目的:研究仙灵骨葆胶囊对慢性镉中毒导致的肾损伤和骨骼损伤的保护作用。方法:建立C57BL/6小鼠慢性镉中毒模型,腹腔注射氯化镉水溶液（2.0mg/kg）4周诱导小鼠的肾损伤。（1）肾保护作用研究:25只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、仙灵骨葆胶囊高、中、低剂量组,每组5只。造模前预先给药10天,造模后持续给药至造模结束。给药结束后,眼球取血分离血清测定小鼠血清中肌酐（Cr）、尿素
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目的:研究仙灵骨葆胶囊对慢性镉中毒导致的肾损伤和骨骼损伤的保护作用。方法:建立C57BL/6小鼠慢性镉中毒模型,腹腔注射氯化镉水溶液（2.0mg/kg）4周诱导小鼠的肾损伤。（1）肾保护作用研究:25只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、仙灵骨葆胶囊高、中、低剂量组,每组5只。造模前预先给药10天,造模后持续给药至造模结束。给药结束后,眼球取血分离血清测定小鼠血清中肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）的水平;取小鼠肾脏做HE染色观察肾脏病理改变;提取肾脏蛋白,免疫印迹法检测小鼠肾脏自噬水平,综合评价各组小鼠肾脏损伤情况。（2）骨骼保护作用研究:取C57BL/6小鼠血清检测血清中组织蛋白酶K（CTSK）、碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（OCN）和基质金属蛋白酶9（MMP9）的表达水平;分离C57BL/6小鼠股骨分别进行HE染色观察股骨远端骨小梁受损及骨折情况;Micro-CT观察小鼠股骨远端微结构的改变,3D重建后进行骨形态计量学分析;提取骨蛋白进行骨转换蛋白抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）和骨形成特异转录因子（RUNX2）的蛋白表达水平。结果:通过HE染色发现造模后的小鼠肾脏中肾小球出现了明显的萎缩、肾小管弥漫性水肿及坏死,同时伴有红细胞渗出表现,表明肾损伤模型建立成功。（1）模型组小鼠血清中Cr和BUN水平显著升高,仙灵骨葆胶囊各剂量组均降低了小鼠血清中Cr和BUN的水平;HE染色观察到模型组小鼠肾脏中肾小球出现了明显的萎缩、肾小管弥漫性水肿及坏死,同时伴有红细胞渗出,仙灵骨葆胶囊各剂量组小鼠肾脏肾小管病理表现明显改善;自噬蛋白表达水平检测模型组小鼠自噬通量增加,仙灵骨葆胶囊自噬水平相对较低,仙灵骨葆胶囊能够保护肾脏并维持肾脏的正常功能。（2）通过ELISA实验检测,模型对照组小鼠血清中CTSK、ALP、MMP9表达水平显著升高,仙灵骨葆胶囊低、中和高剂量均显著降低了小鼠血清CTSK、ALP的表达水平。模型对照组小鼠血清中OCN表达水平显著降低,仙灵骨葆胶囊低、中和高剂量均显著上调了小鼠血清OCN表达水平;HE染色及CT结果观察到模型组小鼠股骨远端骨小梁发生了多出碎裂、骨折和数量的减少,仙灵骨葆胶囊各剂量组未出现骨折现象,中、高剂量组骨小梁数量和宽度增加;骨形态计量学结果表明,各组小鼠BMD无明显差异,模型组小鼠DA显著升高,仙灵骨葆胶囊各剂量组DA均显著降低,模型对照组Tb.N、Tb.Th显著降低,仙灵骨葆胶囊各剂量组Tb.N、Tb.Th均显著升高,模型对照组Tb.Sp显著升高与模型对照组相比,仙灵骨葆胶囊低剂量、高剂量组Tb.Sp均显著降低;Western-blot结果表明,模型对照组小鼠股骨TRAP蛋白表达水平显著上调,仙灵骨葆各剂量组小鼠股骨TRAP蛋白表达水平均显著下调,模型对照组小鼠股骨RUNX2蛋白表达水平显著下调,仙灵骨葆各剂量组小鼠股骨RUNX2蛋白表达水平均显著上调。结论:（1）仙灵骨葆胶囊能够显著减轻镉中毒小鼠肾小管水肿、坏死和红细胞渗出,保护肾单位;仙灵骨葆胶囊能够显著降低镉中毒小鼠血清尿素氮和肌酐水平,维持肾脏正常功能;通过检测自噬通量验证了仙灵骨葆胶囊对镉中毒小鼠肾脏损伤具有预防和保护作用。（2）仙灵骨葆胶囊能够显著促进镉中毒小鼠骨形成,降低骨吸收,有效维持骨转换的平衡;仙灵骨葆胶囊能够显著改善镉中毒小鼠股骨骨折、碎裂情况,预防骨组织损伤,对骨重建具有积极意义。
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