【摘 要】
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目的:探讨miR-193a-3P影响MCF-7/ADR细胞阿霉素化疗耐药可能的机制,为发现寻找新的化疗靶点及逆转阿霉素耐药提供实验依据。方法:(1)通过Lipofectamine?(脂质体)2000将miR-193a-3p的模拟物(mimic)及抑制物(inhibitor)分别转染进入MCF-7及MCF-7/ADR细胞内,分别设miRNA阴性片段组(阴性对照)及空白对照;(2)通过四唑盐比色法(T
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目的:探讨miR-193a-3P影响MCF-7/ADR细胞阿霉素化疗耐药可能的机制,为发现寻找新的化疗靶点及逆转阿霉素耐药提供实验依据。方法:(1)通过Lipofectamine?(脂质体)2000将miR-193a-3p的模拟物(mimic)及抑制物(inhibitor)分别转染进入MCF-7及MCF-7/ADR细胞内,分别设miRNA阴性片段组(阴性对照)及空白对照;(2)通过四唑盐比色法(Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide,MTT)检测细胞转染后的细胞增殖以及在不同浓度药物下增殖抑制情况(3)利用生物信息学网站预测miR-193a-3p下游调控蛋白细胞周期素蛋白(Recombinant Cyclin D1,CCND1)并进行基因功能分析;(4)利用实时荧光定量聚合酶链锁反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测转染效率、信使RNA含量。(5)蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)方法检测细胞中CCND1蛋白的差异表达。结果:(1)miR-193a-3p在MCF-7细胞中较MCF-7/ADR细胞中表达升高3.01±0.20倍,CCND1在MCF-7/ADR细胞中表达较MCF-7细胞中表达升高4.36±0.57倍;(2)转染miR-193a-3p模拟物、抑制物、si-CCND1效率大于80%;(3)过表达miR-193a-3p后MCF-7/ADR细胞耐药性降低6.75倍;(4)沉默CCND1后使MCF-7/ADR对阿霉素耐药性降低8.41倍;(5)过表达miR-193a-3p对MCF-7/ADR细胞迁移能力无明显影响;(6)生物信息学网站预测miR-193a-3p下游靶基因可能为CCND1;(7)过表达miR-193a-3p降低CCND1蛋白表达30.77%。结论:miR-193a-3p可能通过抑制CCND1的表达,逆转乳腺癌MCF-7/ADR细胞对阿霉素药物耐药性。
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