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本文首次对新近从国外引进的新城疫热稳定性天然弱毒株B95的免疫学和分子生物学特性进行了一系列深入研究。 B95经点眼、饮水、喷雾、肌肉注射途径接种,均获得良好的免疫,能够抵抗强毒的攻击,其中点眼组效果最佳。经点眼途径接种B95、V4、Clone30和LaSota,结果表明B95免疫后5天HI抗体即有明显升高,12天达到最高峰,为7log2,到40天时仍保持在4log2。对1日龄、8日龄雏鸡用B95、V4、Clone30、LaSota免疫接种,HI抗体效价表明,B95的免疫不受母源抗体干扰,1日龄雏鸡接种免疫效果优于8日龄。B95同居扩散实验证明,免疫鸡与同笼饲养的非免疫鸡在免疫12天后HI效价基本相同,说明B95具有较强的同居扩散能力。B95与传支H120疫苗同时免疫,结果H120会干扰B95免疫的产生。但如果两者相隔10天以上免疫,B95免疫不受H120的影响;如果同时免疫B95和H120,加大B95的免疫剂量也能获得良好的免疫效果。用棉拭子采B95免疫鸡口腔、泄殖腔的分泌液,检测其中病毒的存在,结果免疫后2~11天鸡口腔和泄殖腔中均有病毒的存在,说明B95免疫鸡带毒时间长。研究结果表明,B95具有不受母源抗体干扰、HI抗体产生快、水平高、持续时间长、同居扩散性强等特点,因此B95是一株优良的、具开发前景的新的新城疫疫苗株。 新城疫病毒株B95接种SPF鸡胚繁殖病毒,经处理后提取病毒基因组RNA,参考国外发表的新城疫病毒株V4的基质膜蛋白(M蛋白)基因序列,设计合成一对特异性引物,经反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出约1240bp大小的特异性片段。将此片段与pBluescript SK载体连接,转化大肠杆菌TGI,经蓝白斑筛选,鉴定阳性克隆后测序。应用DNAMAN、DNASTAR、PepTool软件,对B95M蛋白基因核苷酸序列、氨基酸序列及与其它毒株之间的同源性进行分析,并绘制系统发育进化树。结果表明:B95 M蛋白基因全长1232bp,共编码364个氨基酸,其中碱性氨基酸有47个,酸性氨基酸有30个,等电点为9.7;同源性比较中B95与V4关系最近。目前仅知M蛋白在负链RNA病毒的核酸合成和病毒感染性粒子的组装方面起重要作用,但其功能发挥的具体形式尚不清楚。关于NDV M蛋白国内未见有报道,国外对此蛋白的研究也十分有限,本文克隆出了NDV株B95 M蛋白基因的全序列,为M蛋白的表达及进一步研究其在病毒复制与致病中的作用机理打下了基础。