桃响应LASIODIPLODIA THEOBROMAE侵染的基因表达变化及桃流胶病菌的侵染特性研究

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桃树流胶病在我国桃产区广泛分布,尤其以长江流域及以南地区发病严重,可导致树势衰弱甚至树体死亡,严重危害桃树的栽培和生产。研究报道,桃流胶病的病原菌属于葡萄座腔菌属(Botryosphaeria spp.)真菌,主要包括Fusicoccum aesculi,Diplodia seriata和Lasiodiplodia theobromae三个种。桃胶的主要成分为多糖,因此研究认为胶体形成与树体内的糖代谢关系密切。本研究利用RNA-Seq,研究了桃树响应L.theobromae侵染后的基因表达变化,探讨了乙烯和茉莉酸在流胶病发病过程中作用,同时从病原菌的分离鉴定和组织病理学方面研究了皮孔流胶现象,分析了流胶病菌的侵染特性并鉴定了一株新的桃流胶病病原菌。主要结果如下:1.RNA-Seq分析结果表明,L.theobromae诱导了桃枝条组织的衰老和一系列防御反应,促进了新的多糖合成并抑制了一些多糖的降解。RNA-Seq共检出20772个基因,其中4231、3750、3453和3612个基因分别在接种后12 h、24 h、48 h和60 h时差异表达。共差异表达基因为920个,其中515个上调表达,405个下调表达。GO分析显示,接种L.theobromae后,桃枝条的苯丙素合成代谢、尿苷二磷酸(UDP)糖基转移酶相关基因显著上调表达,而光合作用相关基因表达受到明显抑制。糖代谢途径中的差异基因表达分析显示,细胞壁降解被促进,但是果胶和纤维素的降解也伴随着新的合成;与淀粉和蔗糖分解相关的基因上调表达,葡萄糖-6-磷酸转运蛋白的表达增强;接种后,UDP-半乳糖、UDP-木糖与UDP-D-甘露糖合成相关基因的表达被促进,这些物质都是多糖合成的前体;粘多糖降解相关基因的表达被抑制。桃枝条接种L.theobromae后促进了乙烯的释放,乙烯合成与信号转导相关基因的表达水平也显著提高;接种后12 h,茉莉酸合成相关基因显著上调表达。2%的茉莉酸甲酯(茉莉酸甲酯/羊毛脂,m/m)可稳定诱导桃一年生离体枝条流胶,促进了枝条乙烯的释放,降低了可溶性糖的含量;外源茉莉酸甲酯在早期抑制了桃枝条茉莉酸合成相关基因的表达,但在后期起促进作用。2.从桃树皮孔组织中可以稳定的分离到F.aesculi,F.aesculi在田间表现出潜伏侵染特性,分离到的Neofusicoccum parvum(有性型Botryosphaeria parva)鉴定为一株新的桃流胶病菌。F.aesculi在健康的皮孔组织中也能分离到;F.aesculi产生的分生孢子器位于枝条韧皮部,L.theobromae产生的分生孢子器位于外表皮;N.parvum的分生孢子呈纺锤形或椭圆形,透明,有些孢子有双隔,隔中间颜色变深。人工接种发现N.parvum的致病力较强,枝条接种后可产生明显的褐色病斑和流胶反应。
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